利用RAPD技术对三种绒螯蟹亲缘关系的研究精选.pdfVIP

维普资讯 f2，0、／1＆ 第 23卷 第 2期 水 生 生 物 学 报 Vo】23．№ 2 1999年 6月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA Jun． 1999 利用 RAPD技术对三种绒螯蟹亲缘 关系的研究 C2f， 2 ． 谢 浩 陆仁后。项超美 张 菁 邱 涛 (中国科学院水生生物研究所，武汉 430072 摘耍 采用 RAPD技术结合 一定的形态学研究手段，对中华绒整蟹、日本绒整蟹及其合浦 亚种进行亲缘关系的研究，为三种缄整蟹 的种及亚种分析提供重要资料。三种绒整蟹 的第 四 步足前节长宽比值，与其分类标本吻合或基本吻合。用一组引物，对每种各 lO个个体 的基 因 组 DNA进行扩增，得到一批特异．可重复的扩增图谱；扩增 区带 的相似率分析表明，中华缄整 蟹与 日本缄整蟹的亲缘关系远，丽 日本缄整蟹合浦亚种与 日本绒整蟹近。最后，对文中RAPD 分析的取样数量及其鉴别标记的可行性等问题作了讨论。 中华绒螯蟹是我国特有 的名贵水产资源，具有极高 的经济价值。 日本绒螯蟹及其台 浦亚种，也是我国南方具有很大开发价值的资源蟹群 。 由于 日本绒螯蟹和中华绒螯蟹在形态上极其相似，而二者在 中国的分布又有交叉，因 而 曾有人提出，中国南方的 日本绒螯蟹 与中华绒螯蟹是 同种的不同亚种或不 同的生态表 型群体 “～。日本绒螯蟹合浦亚种在形态上介于 中华绒螯蟹及 日本绒螯蟹之间，但更接近 于 日本绒螯蟹0l。故此，有必要从 DNA分子水平对三者的亲缘关系作进一步研究 近年来．由于中华绒螯蟹人工养殖区域的扩大，估计 已开始导致绒螯蟹不同种或亚种 的混杂。从养殖、育种和种质资源保护角度出发，迫切要求对三种绒螯蟹的亲缘关系进行 确定 ，以及提供有效 的方法对这些物种进行快速鉴别 。 1990年 Williams小组 和 Welsh小组 首创 的RAPD技术，是研究基 因组多态性 的新 方法，它从 DNA水平直接反映遗传物质的差异，具有灵敏、简便、快速的优点，正广泛应用 于基 因组研究的各个方面。 为此，选用三种绒螯蟹，即中华绒螯蟹、日本绒螯蟹、日本绒螯蟹合浦亚种作为实验对 象，采用RAPD技术结合形态学手段，从DNA水平揭示三种绒螯蟹的遗传亲缘关系，为绒 螯蟹种质资源的鉴别和保护提供研究依据。 国家 自然科学基盘资助项 目和国家 九五 项 目 I997_03—24收到 I998-12-I2惨 回 维普资讯 2期 谢 浩等：利用RAPD~术对三种缄螯蟹亲缘关系的研究 121 1 材料和方法 1．1 材料采燕 中华绒螯蟹 (EriocheirsinensisH．Milne—Edwards，简写为 Es)，成蟹，采 白湖北武汉 日本绒螯蟹 (E japonicusdeHaan，简写为 )，成蟹，采 白广东澳头。 日本 绒螯蟹合浦亚种 (EjaponicushepuensisDai，简写为Ejh)，成蟹，采 白广西合浦 1．2 形态学测 ■ 根据戴爱云D及我们过去测量的结果，三种绒螯蟹第四步足的前节长 宽之 比，具有明显的差异，较容易进行定量研究。三种绒螯蟹样品各取一定数量的个体， 测定其第 四步足前节的长度 (L)和宽度 (w)，计算 比值 B(=L／w)，从而进行定量分析。 1．3 横板的制备 取出每个个体的新鲜肝胰脏组织，分别用 70％的酒精固定 ，4℃保存待 用 (一般不超过三个月)。根据Blin和 Sta