采用LCMSMS法同时定量分析人血清中20种抗癫痫药物-Agilent.PDFVIP

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采用LCMSMS法同时定量分析人血清中20种抗癫痫药物-Agilent.PDF

采用 LC/MS/MS 法同时定量分析 人血清中 20 种抗癫痫药物 应用简报 临床研究 作者 摘要 1 2 Lauren E. Frick ,Carrie J. Adler 和 由于抗癫痫药物种类繁多,而且这些药物在人血清中的浓度可能差异很大, Vaughn P. Miller1 导致监测抗癫痫药物非常具有挑战性。因此,用于这些药物的高品质分析 1 必须能够在多个数量级内同步监测多种化合物。液相色谱-质谱 (LC/MS/MS) 安捷伦科技有限公司 法就特别适用于这种分析。为了定量分析人血清中 20 种抗癫痫药物,开发 Lexington,MA 了一种灵敏度高、特异性好的方法。该方法通过一种简单的蛋白质沉淀/ 2 安捷伦科技有限公司 稀释方案配制样品。可在较宽的动态范围内定量分析物,精确度、重现性以 Santa Clara,CA 及 R2 值都非常出色。 前言 内完成。对 20 个目标化合物中每个化 样品前处理 液相色谱-质谱 (LC/MS/MS) 检测方 合物(包括丙戊酸)的两个离子对进 将 20 种药物标准品加标到空白人血清 法的主要优势在于其可在一次进样中 行监测。使用 15 个同位素标记内标来 中,得到高浓度样品。用空白血清以 同时监测多种分析物。本研究使用 显示差异抑制,并确保色谱图定量结 1:2 连续稀释样品,得到 7 个较低浓度 LC/MS/MS 分析方法来定量分析人血 果的准确性和重现性。另外还对磷脂 的样品。将 40 µL 样品或对照与 40 µL 清中的一组 20 种抗癫痫药物。与此相 的离子对进行监测,以验证这类内源 内标溶液在 120 µL 纯甲醇中混合。将 反,由于相似分析物之间的浓度差异 性分子的干扰最小。 样品涡旋混合 30 秒后,在 10000 rpm 较大,以往的分析通常只能监测少数 校准曲线准确度在最低校准浓度下在 下离心 10 分钟。然后取 50 µL 上清 几种化合物。该组中的化合物包括: 预期浓度的 20% 内,在较高浓度下在 液加入 450 µL 水中,取 4 µL 进样到 乙酰瑞替加滨、卡马西平-10,11-环氧 15% 内。重现性良好,CV 均小于 15% , LC/MS 系统。 化物、卡马西平、10,11-二氢-10-羟基 甚至大部分还小于 10%。所有 R2 值均 数据分析 卡马西平、非氨酯、加巴喷丁、拉科 大于 0.997 ,其中一些化合物在浓度范 酰胺、拉莫三嗪、左乙拉西坦、奥卡 围内呈现线性响应,而其他化合物则 利用 Agilent MassHunter 采集软件 西平、苯巴比妥、苯妥英、普瑞巴 需要二次拟合。 (B.08.00) 进行系统控制和数据采集。 林、瑞替加滨、卢非酰胺、噻加宾、 利用 MassHunter Acquisition Optimizer 托吡酯、丙戊酸、氨己烯酸和唑尼沙 实验部分 软件获得 MS/MS 离子对,在进样每 胺。分析方法使用 Agilent 6460 三重四 种化合物或内标的纯溶液时确定最佳 极杆质谱仪在宽浓度范围内同时检测 化学品与试剂 的母离子和碎片离子、碎裂电压和碰 这些化合物。各种分析物的校准浓度 用于基质匹配校准物的人血清购自 撞能量。使用 Agilent MassHunter 定 范围为

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