环巴胺对胃癌细胞MC增殖凋亡的影响.docVIP

精品论文 参考文献 环巴胺对胃癌细胞MC增殖凋亡的影响 冯广跃1 闫慧明1 孟鹏鹏2 孙振卿1 1山西医科大学第二临床医学院普外科 山西太原 030000; 2晋城市矿务局总医院普外科 山西晋城 048000 【中图分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）24-0028-03 【摘要】目的 研究Hedgehog信号通路阻断剂(环巴胺)对MC细胞增殖凋亡的影响。方法 取对数生长期MC细胞分为环巴胺处理组及阴性对照组,以1、5、10mu;mol/L环巴胺处理MC细胞,分别在24、48、72h后采用MTT法检测其生长抑制率；流式细胞术检测对照组和10mu;mol/L环巴胺实验组对细胞周期的影响。结果 环巴胺对MC细胞的抑制作用呈时效和量效依赖关系。1、5、10mu;mol/L浓度组对细胞的生存率分别为(50.03plusmn;14.02)%、(49.76plusmn;14.14)%和(37.87plusmn;19.53)%,组间比较差异有统计学意义(Plt;0.001)。流式细胞术检测发现,环巴胺浓度达10mu;mol/L,干预24h后G1期细胞比例明显升高。对照组、10mu;mol/L浓度实验组的G1期细胞百分比分别为: 33.94%、49.83%；细胞凋亡率对照组和10mu;mol/L浓度实验组分别为1.34%、7.09%。讨论 环巴胺可以抑制MC细胞的增殖能力和诱导MC细胞凋亡的作用，其机制与抑制Hedgehog信号通路有关。 【关键词】环巴胺 Hedgehog信号通路 MC 细胞周期 细胞凋亡 环巴胺(cyclopamine)是从藜芦属植物内分离得到的一种异甾体类生物碱，因其致畸作用而于20世纪60年代被发现。Hedgehog基因在人类进化过程中高度保守，它最初是从果蝇(Drosophila)体内分离出的一种分节极性基因 (segementpolaritygenes)，调节果蝇胚胎角质层的发育模式。之后的研究证实了日edgehog信号通路的失调参与了人类多种实体瘤的形成，包括胰腺癌、基底细胞癌、髓母细胞瘤、前列腺癌、乳腺癌和胃癌等，并直接促进肿瘤的复发、转移和侵袭等一系列恶性生物学行为[1-5]。1998年，环巴胺作为一种Hedgehog信号通路的阻断剂在果蝇体中得到证实[6]。环巴胺可改变Hh通路的平滑蛋白(smoothened,Smo)的空间结构而抑制Smo的活性,是该通路的特异性阻断剂。最近研究发现，Hedgehog信号通路的异常激活可能与胃癌的发生发展有关[7]。MC细胞是本实验通过前期实验利用亚硝酰胺类化合物N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）诱导人类胃上皮永生化细胞GES-1恶性转化后所得细胞[8]。目前国内外还没有关于环巴胺与胃癌细胞MC的关系研究。本实验旨在研究环巴胺对胃癌细胞MC的体外生长抑制及诱导凋亡作用，并进一步探讨其可能的作用机制。 1 材料和方法 1.1 材料 MC细胞株由本实验室提供，环巴胺购自Biomol公司，DMEM及胎牛血清购自Gibco公司,FACSCalibur流式细胞仪购自美国BeetonDiekinson公司。 1.2方法 1.2.1细胞培养 MC细胞培养于含有10%胎牛血清DMEM培养基中，在5%CO2，37℃的环境中单层生长。每48h更换培养液，用胰酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。 1.2.2 MTT法检测细胞增殖 (1)收获对数生长期细胞接种入96孔板，按2000个细胞/200?l培养液/孔，复设3孔，置于细胞培养箱中以含10%血清的DMEM培养液常规培养； (2)分别在第24、48、72h天取出细胞进行MTT检测;每孔加入MTT溶液(10mg/ml)20mu;l，继续于37℃孵育4h后，吸弃上清; (3)每孔加入150mu;l DMSO，室温下微板孔震动器上振荡 10min以溶解结晶; (4)在ELISA检测仪上测定各孔的 A490nm值； (5)设置仅含培养液不加细胞的孔作为空白对照，作为调零孔; (6)以时间为横坐标，3复孔的平均光吸收值为纵坐标，记录细胞增殖情况，并进行统计学分析，以抑制率(IR)表示细胞生长抑制情况。IR=(1-处理组吸光度)/(阴性对照组吸光度)times;100%。 1.2.3 流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期 (l)获取对照组和10mu;mol/L环巴胺实验组[14]细胞，取l.5times;105细胞于2ml离心管中，室温离心1500rpmtimes;5m