超强毒IBDV细胞克隆化毒回鸡后的致病性与VP2基因高变区的分子变化研究.pdf

优秀论文 超强毒IBDV细胞克隆化毒回鸡后的致病性与VP2 基因高变区的分子变化 朱瑞良崔治中’ 张纪元赵静孙淑红丁家波 (山东农业大学动物科技学院山东，泰安271018) [摘 要] 4从6．7％增加至13“、17％和23％；但克隆4I和8 3的致病性变化相对较小。相对于原始囊毒及鸡胚毒，4个克隆化毒在测序的 不密切，而与对细胞培养或组织的亲和性的关系更为密切。本研究最重要的意义在于建立的超强毒GX8／99株细胞克隆化毒及其 相应的回鸡传代毒系列，为研究vvIBDV其它基因变异与致病性及其它生物学特性的关系提供了一个胬的技术平台和必要的研究 材料。 [关键词]超强毒；鸡传染性法氏囊病病毒}克隆，致病性；氨基酸 and 毒株。Brown 来阐明VP2高变区的碱基或氨基酸变异与致病性或其它生物学特性的关系。与此同时，国内外也先后有人对 系，但由于均没有将病毒进行克隆化，因此研究的对象始终是一个病毒群体，很难确定不同传代阶段病毒的差异 隆化毒在回归鸡体传代过程中致病性与vP。基因高变区的分子变化。 1材料与方法 1．1病毒 死率可达80～90％E“。 1．2试验总体设计 基金项目：本研究内容得到国家自然科学基金重大项目、江苏高校省级重点实验室开放课题(kjsO9030)、山东省优 秀中青年科学家科研奖励基金(03BSl40)、山东省教育厅科研项目(J02H05)赍助。 作者简介；来璃良(1963一)，男，山东菏泽人，救授，博士，博士生导师，从事动物微生物学和分子病毒学研究。E—mail：zhurl cn @sdau．edu 通讯作者；崔治中，E—mail；zzcui@sdau．edu．cn 一165 生垦查墼簦堡芏金宣煎堂坌鱼箜士三达堂鲞翌过盒堡塞塞 Gx8／99株(囊毒) ‘ SPF鸡胚传10代 ● 鸡胚成纤维细胞(CEF)盲传至出现细胞病变 ★ 用无限稀释法连续克隆2次 (取数个独立的克隆病毒进行核酸测序和致病性测定) 将每个病毒克隆分别回归SPF鸡，用囊毒连续传10代(BI一10) + ● 将细胞适应克隆毒及其回归鸡的 将细胞适应克隆毒及其回归鸡的 l、5、10代毒在SPF鸡做致病性实验 1、5、10代毒做VP：扩增及ENA测序 比较各代次病毒的致病性及其VR高变区序列变化 1．3病毒的鸡胚传代 按崔治中的方法01进行，分别取鸡胚传1、5、10代毒保存备用。 1．4 CEF适应毒的建立 将鸡胚10代毒接种CEF后，连续盲传，直至出现细胞瘸变或检出病毒。 1．5不同样品中病毒的检测 ELISA 分别用]BDV感染康复鸡的多价血清做琼脂扩散沉淀反应(AGP)或用河南省农科院生产的]BDV 试纸条(Stip)检测。 1．6 CEF细胞适应毒的克隆 细胞培养板上的CEF中，每个稀释度接种8孔。用这种无限稀释法来纯化和克隆病毒。接种病毒后，连续观