谷胱甘肽发酵生产研讨.pdf

发酵工程学科的进展 ——第四班叁圈发酵工程学术讨论备论文采 谷胱甘肽发酵生产研究 贺小贤， 肖平，吴艳娜，赵少欣 (臃西科技大学，成用712081) 擅要：各胱甘肽是生特体内一种重要的活性三肽，具有重要的生理琦施。作为功能性食品 添加荆，在套品工业有广泛曲应用前景．在单因素发酵试验的基础上，通过正交试验，研究 了酿酒酵母发酵生产咎胱甘肽的培养羞的组成以厦发酵培养条件。发酵培养基组成研究结 果表明，在蔗糖浓度2“、酵母膏浓度1“、(NH·)：S04浓度0．6“、芈肚氨醺澈度则为 4mmol／L的培养基中，播床培养36h。GSH产量可选155mg／L．发酵培养条件优化结果表 明，在最佳发酵培养基中，发酵时阃30h，发酵温度30℃、撂床转速250r／min、接种量3“、 250mL三角瓶装浪量15mL。雀胱甘肚产量可达248mg／L，比发酵条件优化前提商了60％。 关键铘：咎胱甘肽，畦酒酵母；发酵培养基；摇瓶发酵；发酵条件优化 前言 活性三肚．是最主要的非蛋白巯基化合物．广泛存在于动、植物和微生物细胞中。有维持 细胞正常功能和红细胞膜完整性，参与氨基酸和铁的吸收与转运等重要生理功能[1]。 GSH也广泛运用于食品加工的各个领域，如调味食品、乳制品、口服保健品等。GSH最 突出的功能体现在它的抗氧化作用上，被称为“三倍效能的抗衰老氨基酸“”。国外在 七、八十年代就有多个关于GSH的专利，对GsH的生物合成进行了大量的研究，GSH 在日本被认为是21世纪最有希望的保健食品之一。国内从九十年代开始了GSH的相 关研究，我国卫功元等人研究了产朊假丝酵母流加法生产GSH，GSH产量达到857． 2m∥L。何俊男等人对藤黄八叠球菌进行紫外诱变处理，筛选到一株抗乙硫氨酸和氯化 锌的抗性菌株，该突变株在发酵液中台成谷胱甘肽的产量可达160．6mg／L。本论文报道 利用常规酿酒酵母生产谷胱甘肽的培养基组成和发酵培养条件，通过优化培养条件，提 高谷胱甘肽的产量，为工业化生产奠定基础。 1材料与方法 1．1菌种 酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)：由本教研室提供。 1．2培养基 ·7H200．05％，KH2PO,0．1％，K：HPO‘·3H200．2,5％，CaCl=·2H200．015％， 0．8mg／L， NH．H。Po‘0．05％，生物素5,u．g／L，维生素B1 贺小贤等；谷胱甘肽发酵生产研究 1．3分析方法 1．3．1发酵液中残糖浓度测定酶膜法(SBA-40C型生物传感分析仪法) 1．3．2谷胱甘肽含量的测定方法亚硝基铁氰化钠法 湿菌体置85℃烘干至恒重，称量。 1．3．4谷胱甘肽的提取方法温差破碎法． 2结果与讨论 2．1发酵培养基组成的研究 发酵培养基组成对菌体生长繁殖，产物的生物合成，产品的分离精制SGH的产量都 有重要影响。不同微生物生长情况和积累发酵产物所需的培养基不同，但所有的发酵培 养基都必须提供微生物生长繁殖和产物合成所需的碳源、氮源、无机元素、生长因子等。 因此从微生物营养要求的特点和生产工艺的要求出发，对发酵培养基进行优化，使之即 满足微生物生长的需要，又能获得高产的产品o】。 酵母细胞内的GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸三种前体物质在GSH合成酶的 作用下合成的，因此在培养基中添加前体物质有利于SGH生物合成。半胱氨酸是促进 GSH合成的关键氨基酸，它能够明显促进胞内GSH的合成，提高GSH的产量啪。因此 在单因素确定碳源、氮源种类的基础上。对发酵培养基中的碳源(蔗糖)、有机氮源(酵母 膏)，无机氮源(硫酸胺)、前体物质(半胱氨酸)的含量进行研究，通过正交试验优化发酵 20mL，发酵时间36h，以提取的GSH的总量为考察指标，正交实验方案设计及结果直观 分析表试验结果如表1。 寰l正交实验方案设计殛结果直观分析裹 第四次全国发酵工程学术讨论会 根据表1的直观分析可以看出，各因素对实验结果影响的主次关系为DBA c，A、B、C、D四因素的最优组合为A。Bc2