谷氨酸发酵途径分析及代谢改造策略研究.pdf

誊；!蠹{|要氡蔓基≯酸≯籍“受≯重量 谷氨酸发酵途径分析及 代谢改造策略 陈宁 刘辉 谢希贤 天津科技大学生物工程学院 analysis)是代谢工程中用辅助计算，对谷氨酸棒杆菌的L_谷氨酸合成的整个 途径分析(pathway 以指导遗传操作的理论基础，是代谢网络分析的重 代谢网络进行途径分析，从而指导代谢工程的操 要方法之一。这些反应模型可由凸分析确定，由计 作。基元模型分析是途径分析的重要工具之一。应 算机算得。若以向量e来代表一个基本反应模型， 用基元模型分析可以确定最大理论产率模型，找到 则所有可能代谢流的向量Y可定义为这些模型的 目的产物合成的最优途径等。目前已有许多基元模 ei(ai芝O)。实际上细胞内 非线性组合：y-∑ai 型分析成功应用的实例，如酿酒酵母合成聚一p羟丁 代谢网络就是由基本反应模型的非负线性组合产 酸，大肠杆菌合成芳香族氨基酸等。 生的。在这些基本反应模型中有一个代表最高的产 一、L．谷氨酸合成代谢网络分析 率和代谢流分布的理想载流途径。理想载流途径的 ．考虑副产物乳酸和丙氨酸，建立L广谷氨酸合成 构建开始于酶的确定、理论产率的计算和确定最优 代谢网络，其化学方程式如下： 的代谢流分布，因此途径分析对于目的产物理想载 R1：Glc+PEP=G6P+Pyr． 流途径的构建具有重要意义。 R2： G6P=F6P． 谷氨酸棒杆菌广泛应用于多种氨基酸的工业 R3：F6P+ATP=2GAP+ADP． 生产，如谷氨酸、赖氨酸等。作为代谢工程的一个 R4： 极具前景的理论，途径分析研究对于指导谷氨酸棒 ATP 4-H20．‘ 杆菌发酵生产谷氨酸的菌种选育及过程控制具有 R5：PEP4-ADP=ATP+Pyr． 重要意义。提高菌种产酸水平的传统方法是切断支 R6：Pyr+CoA 路代谢，解除反馈抑制。现代的重组DNA技术同 NADH． 样偏重于合成支路的改造，比如限速酶的过量表 达。这些方式常常很难达到预期的目的。因为过多 2NADPH． 地偏重于终端支路代谢的操作，而忽略了中心代谢 R8：RIBU5P=XYL5P． 途径导向支路代谢的能力。因此有必要采用计算机 R9：RmU5P=RIB5P． ·57· 2007年全国发酵行业高峰论坛 RIO：XYLSP4-RIB5P=SED7P4-GAP．采用基元模型分析方法对谷氨酸棒杆菌合成 R12；GAP+SEDTP=F6P+E4P．摩尔产率为100％。基元模型如下： ．R13：AcCoA4-0AA=CoA+CIT． 4-C02+ R14：CIT=ICI． Glu+7AIP R15： 4-NADP=KG 4-2ATP ICI+H20 4-C02+ NADPH． 3、1．16667Glc4-2 ADP=3 NH3+02+6H20 R16：KG+CoA+NAD=S