雌二醇类环境内分泌干扰物的免疫分析研讨.pdf

雌二醇类环境内分泌干扰物的免疫分析研究 庄惠生·，王术皓，王琼娥 (1．东华大学环境科学与工程学院，上海201620；2．聊城大学化学化工学院，聊城252059) 环境内分泌干扰物(简称EEDs，亦称环境激 检测手段有放射示踪法、酶标显色法、荧光探针 素、环境荷尔蒙)，在环境中，通过各种途径直接 和化学发光探针法；放射示踪法虽具有高灵敏度 或间接进入人体后，影响人类生殖系统、免疫系 特点，但存在放射性污染环境问题；酶标显色法 统、神经系统、心血管系统的正常机能，并引发癌 具有仪器简单使用方便，但灵敏度较低；荧光探 症。因此，环境内分泌干扰物已日益成为各国政 针和化学发光探针法具有高灵敏度，所用仪器简 府和科学家关注的重大环境问题，并迅速成为国 单，已受到广大环境、化学、医学、生物等领域的 际环境保护研究的热点。 科学工作者的欢迎。近年来，对环境内分泌干扰 1996年，美国《波士顿环境》报记者安·达玛诺物的监测分析研究，已成为环分析化学的研究热 斯基编著的《我们被偷走的未来》一书在美国出 点，本课题组率先开展了环境中内分泌干扰物的 版【l】，首先提出“环境激素”一词。该书总结了世界 免疫分析研究【8吨]，在国家自然科学基金的资助 各国学者对于环境激素类物质的研究成果，揭开 下，自行设计成功合成了4种雌二醇类环境内分 化学品污染对于人类生殖与物种繁衍的巨大威胁； 泌干扰物的半抗原、完全抗原及相应的抗体，基 因此，美国总统也特别为这本书作序。环境激素 于抗体抗原的特异性反应，结合荧光和化学发光 类物质被公认为第三代环境污染物，在美国，环 分析的高灵敏度，建立了一系列测定雌二醇类环 境激素类研究成为美国环境与自然资源委员会于 境内分泌干扰物的免疫分析新方法，并应用于实 1996年确定的5个最优先项目之一[2]。 际环境样品中微量雌二醇类内分泌干扰物的监测， 目前，世界卫生组织、联合国协同化学品安 在环境微量内分泌干扰物的免疫分析理论和技术 全国际规划署、国际纯化学与应用化学会、野生 研究中取得了创新性的成果。 动物基金会、欧美各国、日本等相继开展了这方 1雌二醇类环境内分泌干扰物的半抗原和全抗原 面的工作，每年在《自然》、《科学》、《ES＆T》等著 的合成和鉴定 名的国际性杂志上都有许多关于环境内分泌干扰 选择雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、双酚A为雌 物的研究结果发表(3。]。 二醇类环境内分泌干扰物的研究对象，它们均为 环境中内分泌干扰物的含量很低，是以ppb 小分子内分泌干扰物，属于半抗原，只有免疫反 (10’9 应性，无免疫原性，必须使其与载体蛋白偶联，制 g／mL)甚至ppt(10也g／mE)的浓度存在，而且 组分复杂，这给环境监测分析提出了更高的要求。 备完全抗原，才能在动物体内产生免疫应答获得 目前用于环境内分泌干扰物的监测分析方法主要 抗体。从它们的分子结构出发，在它们的分子上 引入连接臂，用于连接蛋白质大分子，制备具有 有气相色谱．质谱(GC—MS)和液相色谱一质谱(M。 MS)，但这两种方法所使用的仪器十分昂贵，不利 免疫原性的完全抗原。 1．通过雌二醇．3-羧甲基醚(E2．CME)的合成， 于推广应用，因此，急需研究用于环境内分泌干 然后经N一羟基琥珀酰亚胺活化后与牛血清白蛋白 扰物的高灵敏度、高选择性及简单方便的监测分 析仪器和分析方法。采用免疫分析方法测定环境 (BSA)偶联，得到全抗原雌二醇．3．羧甲基醚(E2一 中微量