四川山地乌骨鸡IL1β真核表达质粒构建及对IBV DNA疫苗免疫佐剂效应研讨.pdf

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第+二次学术研讨会 备的单克隆抗体检测到。虽然gJ的确切功能还不清楚，但蛋白的这些特征就使得口值得进 一步研究。 Fuchs等…通过同源重组的办法构建了两株酣基因缺失的突变病毒，发现酣基因对病 毒在细胞上的复制是非必需的，审基因的缺失对病毒在细胞间的传播影响很小；封与病毒 感染性病毒粒子的形成密切相关，影响病毒的体外复制，gJ蛋白对病毒在天然宿主内的复 制是必须的。动物试验证实，西缺失的病毒不仅毒力致弱，而且能提供保护性免疫。酣蛋 白可能适于作为野毒感染和疫苗免疫动物血清学鉴别的标志。chang等…1在大肠杆菌中以可 溶形式表达了截短的IuvgJ蛋白，并建立了间接ELIsA方法，不仅可以鉴别疫苗免疫后 两周的SPF鸡和未免疫SPF鸡。还可以鉴别免疫的与未免疫的田间鸡群。本实验表达的截 免疫与未免疫鸡群鉴别诊断方法奠定了基础。 参考文献略 四川山地乌骨鸡IL一1B真核表达质粒构建 及对IBVDNA疫苗免疫佐剂效应研究 徐永莉21王红宁222黄勇l张毂l余协中l唐梦君I鲜凌谨l向青l封浪1叶满玉l刘蕊娜l 【1．四川农业失擘动物科技学院，雅安四川6250142．2四川大学“985工程”西南资译环境与灾害防治年撇 创新平台，四川大学生命科学学院，四川大学动物疾病防控生物工程研究中-心，成都，6100“) 血淋巴细胞RNA中克隆olⅡ，lB基因，将其克隆到PMDl8．T载体测定序列，双酶切后，插八真核表速栽 流式细胞技术检测cD4+．cD8+T淋巴细胞发现．联合佐刺纽与单独IBvDNA组比较在14-2l天期间． DNA D州A疫苗组(85％)，与弱毒苗保护率相当(95％)，但低于灭活苗保护率(100％)．结果表明：IBv 组主要免疫后期发挥作用， pDNmL．1p免疫早期发挥重要作用，二者联合使实验鸡体在整个免疫期较长时 问内发挥较高免疫水平。pDNA儿．1B可显著增强DNA疫苗免疫作用． DNA疫苗 关键词山地鸟骨鸡白细胞介素IB真核表达质粒mv 禽传染性支气管炎(Avi∞Infectiolls 引起的鸡的一种急性、高度接触性的传染病，其特征为病鸡出现呼吸道症状、产蛋数量和品 质下降以及肾脏病变等。目前，该病呈世界性分布。发生于所有养鸡的国家和地区，是严重 危害世界养禽业的重大传染病之一Il』，IBv血清型很多p“，并且新的血清型和变异株不断 出现。目前30多种。疫苗是控制病毒性传染病的重要手段，新型疫苗只保留了与保护性抗原 相关的成分．去除了充当佐剂的成分，经常导致免疫失败，所以急需开发安全新型的免疫佐 剂【”．细胞因子能提高抗原的免疫原性，影响免疫的程度和质量，某些细胞因子就是很强的 疫苗佐剂。一些研究表明IL一1可能是细胞因子网络功能形成的中心，也可作为免疫佐剂 —lB)cDNA。对所得到的克隆进行功能表达。chIL一1B比lNA最初的翻译产物含267个氨 基酸，与人IL．1B的氨基酸同源性为25蚶”J。本研究克隆四川山地乌骨鸡白介素·lp，插入 基盎项目：国家。86r计划项目(2003从241120) 2‘徐永莉．(1976～)，女，山西太原人，在读硕士研究生，主要从事畜禽传染病的研究． ∞通讯作者：王红宁，教授，博士生导师，主要从事动物预防医学与生物工程研究． Email address：whongnin90163．c∞telcphone：028 禽类传染病 的免疫增强作用，在国内外还未见报道，具有重要的理论意义和实用价值。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1试验动物 2周龄非免疫sPF山地乌骨鸡，购自四川省雅安市石棉县畜牧局；动物试验鸡为非免疫 鸡胚．自行孵化。 1．1．2化学试剂· CorlA购自南京生兴生物公司：肝素、小牛血清、淋巴细胞分离液等购自成都博瑞克生 ’ 物技术有限公司。 1．1．3分子生物学试剂 限制性内切酶B蛐lHI和EcoRI、T4DNA Marker 转录酶、RNasin、DNADL2000、TaDDNA聚合酶及其Bu疵r、dNTP．购自大连宝 生物工程有限公司；琼脂糖凝胶