发酵和超滤耦合制备不同分子量壳低聚糖研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨论会论文集 发酵和超滤耦合制备不同分子量壳低聚糖 张 匡， 郑连英 (浙江大学生物工程研究所。杭州310027) 摘要：在5L的发酵罐中，采用高产壳聚糖酶菌株Penicillium sp．ZD-Z1，经半连续发酵 和超滤耦合制备不同分子量壳低聚糖。考察了沈加量、壳聚糖浓度、发酵时间对茵体生长和 产量的影响。同时还研究了超滤分离的操作条件。最佳的制备条件为：当稀释率为0．15 h～，流加壳聚糖浓度为3％的发酵液，发酵时间为96小时，壳低聚糖产量比问歇发酵提高5 M 倍。采用不同截留分子量超滤膜来分离不同分子量的壳低聚糖，当超滤操作压力为0．4 Pa时，膜通量能够维持在稳定水平。通过喷雾干燥获得高纯度壳低聚糖样品。 关键词：壳聚糖发酵超滤；耦合；壳低聚糖，Penicilliumsp．ZD-Z1 前 言 几丁质经脱乙酰基得到。壳聚糖具有抑菌、抗肿瘤、调血脂、调节免疫及活化肠道双歧杆 菌等多种生理功能[5‘8]，在工业、农业、医药、食品、保健等领域受到广泛应用nq]，。但是由 于壳聚糖不溶于水，使其在开发应用上受到很大限制。而由壳聚糖酶降解壳聚糖得到的 小分子量壳低聚糖，易溶于水，很容易被人体吸收。 壳低聚糖的功能和特性很大程度上依赖于它的分子量。以前采用Penicilliumsp． ZD-Z1菌株深层间歇发酵产酶降解壳聚糖易出现产物大量被消耗、对产品的质量的稳定 性及产量影响较大。而采用半连续发酵和超滤耦合制备壳低聚糖有明显优势：(1)半连 续发酵效率更高。(2)产物的不断移出能够缓解酶解反应的产物抑制并且能够延长发酵 时间，极大提高单位酶的利用率。(3)使用合适的超滤膜可以有效地控制产物分子量的 分布。目前发酵和超滤的耦合主要应用在蛋白质和多糖的酶解过程，但很少见于壳低聚 糖的生产。 1 材料与方法 1．1材料 高产壳聚糖酶菌株Penicilliumsp．ZD-Z1由本实验室从土壤中筛选得到。已授权 o) 发明专利(ZL kDa。 壳聚糖由玉环澳兴甲壳素有限公司提供，脱乙酰度90％，分子量290 1．2培养基 种子培养基(g·L-1)：壳聚糖8，氨基葡萄糖盐酸盐2，尿素1，磷酸二氢钾0．6，硫酸 铵1，硫酸镁0．12。琼脂15，pH5．0。 张匡等：发酵和超滤耦合制备不同分子量壳低聚糖 651 5．0。 pH 1．3发酵和超滤的耦合过程 在5L的发酵罐中，发酵条件为：转速180r·min～，温度30℃，发酵液3．5 L，pH 4．65．0，发酵36小时后开始耦合，每2小时从发酵罐中取出发酵液进行抽滤，同时流 加等量发酵培养基，使罐内发酵液体积保持稳定。然后依次用截留分子量为20kDa、5 kDa和2kDa的超滤膜进行超滤，发酵过程中每隔4小时测一次还原糖浓度和菌体浓度， 用来监测发酵过程。实验流程图如图1示。 Reactorusedfor of 图1 system productionchitosan-ollgosaccharide．： 实验中研究了超滤特性、稀释率对发酵过程的影响，并且考察了不同壳聚糖浓度的 发酵液发酵时的降解效果。 1．4壳低聚糖的分离和产品制备 发酵液经抽滤除去菌体后，依次采用截留分子量为20kDa、5kDa和2kDa超滤膜的 k--．,20 k--5 顺序进行超滤，得到壳低聚