hpv分子生物学与宫颈病变病理诊断教材.pptVIP

糖原溶解细胞VS挖空细胞 LSIL（HPV病毒游离状态，一过性感染） 细胞学诊断的要点： 1.细胞成熟，为表层细胞来源。 2.核周空晕透亮，为胞浆塌陷或被破坏造成。 LSIL ASC-US ASC-US ASC-US（可疑HPV一过性感染，无典型挖空表现） 细胞学诊断要点： 1.核有一定异型，有挖空趋势，但核周空晕不透亮。 2.成片聚集的表层细胞，核轻度增大或双核，可伴有角化不全现象。 HSIL HSIL（HPV病毒整合状态，持续性感染） 细胞学诊断要点： 1.高核浆比。 2.核的异型性，主要体现在核膜的不规则以及核染色质增粗。 CIN3 CIN3 CIN3（ HPV病毒整合状态，持续感染，向宫颈癌进展） 组织学诊断要点： 1.核异型明显（肿瘤异倍体细胞的表现）。 2.中表层细胞出现病理性核分裂像。 3.全层细胞密度增加，极性紊乱，丧失正常的组织结构。 4.表层细胞不出现典型的挖空细胞形态。 （四）HPV检测方法及宫颈病变的病理诊断 HPV检测： 1.病毒DNA检测 2.病毒mRNA检测 3.病毒相关蛋白检测 4.病毒靶向检测 低危型HPV主要见于生殖器疣，常见的型别为6型和11型。 高危型HPV与癌前病变和宫颈癌相关，常见的型别为16型和18型。 检测方法有分型检测与不分型检测。 HPV-DNA检测 HC2（不分型） 操作步骤： ①裂解→②杂交→③捕获→④抗原抗体反应→⑤信号放大→⑥结果判读 HC2结果判读：≥1.0pg/ml为阳性，相当于5000拷贝。 如何正确理解HC2的检测结果？ PCR-RDB（分型检测） DA8000全自动核酸分子杂交仪 HPV-DNA分型检测的临床意义？ ① 能区分持续或反复感染。 ② 不同型别有不同的患病风险。 ③ 不同型别有不同的处理方案。 ASCCP2009版指南指出：≥30岁女性 细胞学阴性，而HPV16或18型阳性者，建议阴道镜检测。 细胞学阴性，其它HR-HPV型阳性者，一年后复查HPV-DN 和细胞学。 HPV E6，E7 mRNA检测 HPV 的E6、E7是病毒癌基因，它们的翻译产物介导抑癌基因p53和Rb的降解，从而干扰细胞周期调节。如若癌基因没有表达，则细胞本身不会发生癌变。 E6蛋白能与细胞内 E6相关蛋白 ( E6 AP)形成复合物 ,特异性地结合 p53,并通过依赖蛋白酶系统将其水解 ,使其对细胞生长负调节功能丧失 ,从而引起细胞无限增生并向恶性转化。 E7蛋白是 HPV的主要转化蛋白 ,与控制细胞周期有关的肿瘤抑制蛋白视网膜母细胞瘤蛋白 (Rb)亲和力极高 . E7与 Rb结合使 Rb E2F复合物解离 , E2F被游离 ,从而发挥其转录因子的作用 ,导致细胞周期失控而发生永生化。 HPV E6/E7mRNA 在宫颈组织中表达，说明HPV 病毒表达出癌基因活性。 bDNA技术原理 HPV 相关蛋白检测 人体的细胞周期包括G1，S,G2，M四个时相，且存在多个检查点调节各时相点的转换及细胞周期进程。其中以G1→S期最为重要，因为细胞一旦从G1期进入S期，则不再依赖外界信息刺激而很快自动完成分裂过程，因此G1卡点可以决定细胞继续增值或进入G0期或离开细胞周期进入终末分化或死亡。 细胞周期卡点的转换受控于“细胞周期蛋白（cyclins）-细胞周期依赖性激酶（cdks）-细胞周期依赖性激酶抑制因子（clks）”这组分子网络。 研究最为广泛的一组是：Cyclin D1/cdk4/P16。P16在细胞周期G1卡点中与CyclinD1竞争结合cdk4并特异性抑制其活性，组织细胞尤其是带有损伤DNA的细胞进入S期，从而控制细胞分裂。 P16： 1.在LSIL的敏感性和特异性为74%，在HSIL中则达到97%以上。 2.在LSIL中的表达为点状，散在分布；在HSIL中的表达为灶状，片状连续分布。 P16 HPV分子生物学及宫颈病变病理诊断 一，HPV简介 二，HPV与宫颈癌的关系 三，HPV相关细胞学形态改变及判读要点 四，HPV检测方法及宫颈病变的病理诊断 五，HPV疫苗的研究进展 （一）HPV简介 1.完整的病毒颗粒为一个感染单位，外形呈20面体对称型，外壳有72个衣壳体。 2.HPV基因组为环状双链DNA，含有近8000个碱基对。分为早期区，晚期区和长控区。 Human papillomavirus（HPV） 早期转录区：参与病毒DNA的复制，转录，翻译，调控和细胞转化。 晚期转录区：编码病毒的衣壳蛋白。 上游调控区：又称长控区，通过与转录因子的相互作用调节早期区基因的转录，参与病毒复制，转录的调控。 ① 高危型HPV病毒持续性感染。