疟原虫的镜检技术教材.pptVIP

恶性疟原虫--环状体 环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大 核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫 薄血膜间日疟大滋养体形态 感染的红细胞：胀大褪色，出现形状大小相等、分布均匀、数目较多、鲜红色的薛氏小点。 虫体大小：较大。 胞浆：不规则，浅蓝色，出现阿米巴伪足，有空泡。 核： 红色，一个。 疟色素：有，细小杆状，黄褐色，分布不均匀。 间 日 疟 大 滋 养 体 虫体不规则，较大；阿米巴样空泡明显；疟色素细小，黄褐色。 间日疟大滋养体 恶性疟大滋养体 受感染红细胞：大小正常，颜色较深，可出现较粗、大小不一、分布不匀、数目较少红色茂氏小点。 虫体大小：较小。 胞浆：蓝色，圆形，坚实，体积小。 核：一个，红色。 疟色素：较细的黑褐色颗粒，常集成块。 恶性疟大滋养体 红细胞：胀大，褪色，可有薛氏小点。 胞浆：较不规则，空泡小或消失，浅蓝色。 核： 红色，分裂为二个以上。 色素：黄褐色，分布不均匀。 间日疟未成熟裂殖体 薄血膜疟原虫形态 间 日 疟 未 成 熟 裂 殖 体 * 疟原虫的RDT检测及镜检技术 疟疾的实验室诊断 1.病原学诊断：显微镜血涂片检查结果阳性；这种镜检确诊最可靠。 2.免疫学诊断：（1）循环抗原的检测 （2）循环抗体的检测 3.分子生物学技术：PCR和DNA探针已应用与疟疾的诊断。 分子生物学、血清学技术发展迅猛，但是确诊疟疾的“金标准” 仍然是病原学诊断显微镜检查疟原虫。 ★ 快速诊断试纸条可与镜检疟原虫相互补充。 疟原虫抗原检测 （一）原理 快速检测试剂是通过在硝酸纤维素膜（NC）试纸条上产生可见的条带来检测抗原的一种“免疫-层析”试剂。染色标记抗体与疟原虫抗原结合，复合物由试剂条检测线上的抗体捕获后，形成一条可见的条带（检测线）。 检测的第一步是将溶血剂与血液混合，破坏血红细胞释放疟原虫蛋白，便于与标记抗体靶蛋白结合；然后将血液与标记抗体的混合液置于硝酸纤维试纸条上，并通过毛细管作用和缓冲液/清洗剂推力，使混合液在试纸条上移动并通过检测线与对照线。 OptiMAL IT卡疟疾快速诊断 试剂盒使用说明书 4.将吸血后的毛细管竖立于凹槽2中，捏出全部血液并与凹槽中稀释液混匀约1分钟。 血膜的制作（涂片操作） 涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人，涂2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查； 标本片 发热病人血片 标签 薄血膜的制作 薄血膜 用推片一端边缘的中点从取血部分①取约1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处【左半部分（或第4—6份）】 。 熟练工作者的推片姿势 厚血膜的制作 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个自细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于玻片右1/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签的1、2份相邻的第3份中部）] 。④厚血膜外观：圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC为宜。 标准的疟疾厚薄血膜位置 各种不同的疟疾血片涂制法： 标准血片（1人） 门诊发热病人血片（1人） 居民普查血片（2人） 血膜的制作 血膜编号 血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的号码，以防差错；待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。 染液的种类 染液种类：疟原虫的染色，目前临床上应用最广泛的是瑞氏（Wright stain）和吉氏染液（Giemsa stain）。这些染液中的主要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所成的天青，所以称多色性染剂。 我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效果稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊量大的门诊实验室使用。 染液的种类及染色原理 注意：蛋白质和氨基酸都