端粒酶活性联合DNA异倍体检测在良恶性腹水鉴别诊断中的价值.docVIP

精品论文 参考文献 端粒酶活性联合DNA异倍体检测在良恶性腹水鉴别诊断中的价值 陈建1 罗蕾蕾1 薛亚晶2 　　（1南通市第三人民医院消化内科 江苏南通 226006；2南通市肿瘤医院检验科 江苏南通 226000） 　　【摘要】目的 通过联合检测腹水端粒酶活性与流式细胞仪DNA异倍体检测，探讨两种检测方法在良恶性腹水鉴别诊断中的价值。方法 收集良恶性腹水标本，使用端粒酶活性检测试剂盒检测端粒酶活性，使用流式细胞仪检测DNA异倍体。结果 端粒酶活性检测和DNA异倍体检测诊断恶性腹水的敏感度分别为82.35%、78.43%，特异度分别为94.87%、97.87%。当同时联合两种检测方法，联合检测的敏感度可以达到96.07%，特异度和单个指标并无明显差异。结论 端粒酶活性检测和DNA异倍体检测可以作为良恶性腹水鉴别诊断的有效方法。同时联合端粒酶活性检测和DNA异倍体检测可以增加恶性腹水的检出率。 　　【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）23-0087-02 　　端粒酶活性与肿瘤的发生密切相关，人类90%的肿瘤组织存在异常端粒酶活性，而正常组织细胞端粒酶活性低，甚至无端粒酶活性，因此端粒酶是一个不受组织器官限制的肿瘤标志物[1，2]。 　　人体正常的体细胞均具有比较稳定的DNA二倍体含量，当人体发生癌变或具有恶性潜能的癌前病变时，在其发生、发展过程中可伴随细胞DNA含量的异常改变[3，4]。异倍体是恶性肿瘤的特征性标志之一。测量和分析细胞核DNA含量与倍体对恶性肿瘤的病理诊断、恶性程度判定、疗效估价、预测预后具有重要价值[5，6]。 　　本研究通过联合检测腹水端粒酶活性与流式细胞仪DNA异倍体检测，探讨两种检测方法在良恶性腹水鉴别诊断中的价值。 　　1资料和方法 　　1.1一般资料 　　2010年1月至6月在南通市第三人民医院、南通市肿瘤医院共收集90例腹水标本，恶性腹水为51例，良性腹水为39例。良性腹水中肝硬化腹水为36例，结核性腹水3例。恶性腹水中肝癌为25例，胃癌8例，大肠癌9例，胰腺癌2例，卵巢癌6例，腹膜癌1例。所有病例均经过临床诊断和病理诊断确诊。 　　1.2方法 　　1.2.1取腹水标本20ml，加入PBS洗涤，3000rpm，离心20min，弃去上清，加入细胞裂解液，冰浴30min，16000rpm离心20min吸取上清-70℃保存，待端粒酶活性检测。取腹水标本100ml均加入PBS洗涤，3000rpm离心10min，去细胞悬液，调整细胞数为106/ml，75%乙醇4℃封存，待DNA异倍体检查。 　　1.2.2 端粒酶活性检测:按Telo TAGGGTelonerdsePCR ELISA 试剂盒说明书进行操作，取PCR产物在聚丙烯烷胺凝胶电泳出现间隔6bp的梯形条带为端粒酶活性阳性。 　　1.2.3 DNA倍体分析:使用流式细胞仪检测，以新鲜分离的健康体检者外周血淋巴细胞DNA荧光信号主峰值作为二倍体细胞DNA含量参考值，应用Multicycle DNA含量与细胞周期分析软件提示DNA所示二倍体主峰完全分离的荧光信号（DNA指数ne;1）定义为阳性，提示受检腹水 标本中含DNA异倍体。 　　1.3统计学方法:所有数据均应用SPSS统计软件处理，Plt;0.05为有显著性差异。 　　2 结果 　　2.1良恶性腹水中端粒酶活性检测的差异 　　在良性腹水中，有2例端粒酶活性阳性，阳性率为5.12%，而在恶性腹水中共检测出现42例阳性，阳性率为82.35%。恶性腹水的端粒酶活性阳性率明显高于良性腹水（chi;2=52.74，plt;0.05）。 　　2.2良恶性腹水中DNA异倍体检测的差异 　　在良性腹水中，有1例出现异倍体，阳性率为2.56%，而在恶性腹水中共40例检测出异倍体，阳性率为78.43%。恶性腹水异倍体检出率明显高于良性腹水（x2=51.28，plt;0.05）。 　　2.3两指标联合在良恶性腹水中的差异 　　通过联合端粒酶活性检测和DNA异倍体检测，联合检测对恶性腹水诊断敏感度达96.07%，明显高于单个指标（chi;2=4.99，plt;0.05)，特异度为94.87%，和DNA异倍体相同，和单个指标无明显差异(chi;2=0.34，pgt;0.05)。 　　两指标诊断恶性腹水诊断的特异度敏感度 　　指标 阳性数 敏感度 特异度 　　端粒酶活性 42 82.35 94.87 　　DNA异倍体 40 78.43 97.44 　　两指标联合 49 96.07 94