神经氨酸酶茎部氨基酸缺失对H5N1亚型禽流感病毒生物学特性的影响(论).pdfVIP

46卷4期 微 生 物 学 报 46(4)：542～546 2006年8月4日 4 2006 A嘲№r曲如两gi∞踮l妇 Augllst 王曲直，龙进学，胡顺林，吴艳涛，刘秀梵。 (扬州大学农业部畜禽传染病重点开放实验室扬州225009) AIV生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术，拯救获得5株具有不同NA茎部长度的 个氨基酸的删除或添加突变。通过研究其生物学特性发现，5株重组病毒在sPF鸡胚中繁殖良好，其EID。、MDT和 平均病毒滴度相似；NA茎部长短影响病毒的解凝能力，长茎病毒红细胞解脱能力比短茎病毒强；NA茎部15或20 个氨基酸删除突变提高了重组病毒在MDCK细胞上的繁殖能力，短茎病毒释放出的病毒粒子数量是长茎病毒的lo —100倍，释放时间提前6—10h，短茎病毒在MDcK细胞上形成的空斑也明显比长茎病毒的空斑大。实验结果揭示 了AIV NA茎部氨基酸缺失突变的生物学意义，NA茎部15或20个氨基酸删除突变增强了AIv的细胞适应性，可能 与现阶段邯N1亚型AⅣ宿主范围进一步扩大有关。利用反向．遗传技术成功拯救了5株脚N1，PR8重组流感病毒， 为流感病毒基因功能研究和重组疫苗研究建立了技术平台。通过对AIvNA茎部氨基酸的删除突变提高了病毒在 MDCK细胞上的繁殖产量，为流感病毒细胞苗的生产提供了新的思路。 关键词：115Nl亚型禽流感病毒；神经氨酸酶茎部；氨基酸删除突变；反向遗传操作技术 中圈分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：O001．6209(2∞6)04．0542．05 高致病性禽流感病毒给全球养禽业带来了极大 反向遗传操作技术是随着分子生物学技术发展 的损失，也严重危害着人类健康。H5N1亚型AⅣ起来的新方法。H锄n明n等哺1首次建立了流感病毒 具有极其重要的公共卫生意义。NA是流感病毒重 的8质粒拯救系统，以数量最少的质粒为基础，利用 要的囊膜纤突，具有亚塑特异性，以同源四聚体形式 同一载体实现在细胞内病毒RNA的转录和蛋白质 存在，属于Ⅱ类糖蛋白。NA在电镜下观察，星蘑菇 的表达，进而包装成病毒。该系统已经用于A型和 状结构，由头和茎组成。头部的顶端是NA酶活性 B型流感病毒的拯救n一]。我们应用上述8质粒系 的催化中心，作用是能水解细胞表面的特异性糖蛋 白末端的N．己酰基神经氨酸，避免病毒粒子的聚 集，有利于病毒释放，对病毒在感染细胞周围的扩散 进行重排，同时对NA茎部氨基酸进行删除或添加 能力有很大影响…。NA头部和跨膜锚定区之间的 突变，转染cOs一1细胞后拯救出具有不同茎部长度 部位是茎部[2]。不同亚型的流感病毒茎部氨基酸的 数量和序列存在较大的差异[3】。许多分离株的NA的生物学特性差异，以此阐明NA茎部氨基酸缺失 茎部有氨基酸缺失现象H’5’。比较本室保存的A／ 对H5N1亚型AⅣ生物学特性的影响。 G008e，Ji舳gsu／220／2003(H5N1)、A，Goose，Huado叫1／ 1材料和方法 2000(H5N1)和已发表的17株H5N1亚型AⅣ的NA 基因cDNA序列后发现：刖G，Js，03NA茎部第164位1．1材料 1．1．1 核苷酸位置缺失了60个碱基。A，G，皿，00茎部没 有核苷酸缺失。鸡胚高度适应株A，P剐8，34(H1N1) 茎部天然缺失15个氨基酸HJ。 基金项目：江苏省属高校重大基础研究项目(05ⅪA23016) 。通讯作者。Tel：86—514—7979386；E-Ⅱlail：姐iu@mil．y哪．edu．cn 收稿日期：2005。12—28；接受日期：2006．01．23；修回日期：2006—03．26 万方数据 王曲直等：神经氨酸酶茎部氨基酸缺失对115Nl亚型禽流感病毒生物学特性的影响．，微生物学报(2