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C02膨胀前后烟丝中游离氨基酸的变化研究 张鼎方 刘江生 364021) (龙岩卷烟厂，福建省龙岩市乘风路1299号 摘要：AccQ一2A氨基酸衍生化试剂衍生化、超声波水解提取烟叶中的游离氨基酸、反相高效液相 色谱法测定C02膨胀前后烟丝中的游离氨基酸。结果表明：C02膨胀前后烟丝中的脯氨酸、丝氨酸、 谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸等氨基酸的含量总体有呈下降的趋势，而精氨酸、天冬氨酸等 氨基酸的含量总体上有呈上升的趋势，在C02膨胀前后样品所测16种游离氨基酸的总量大体有下降 趋势(除下部ZO】略有上升)，其中福建B3F烟丝和上部B01烟丝等下降较为明显。 关键词：C02膨胀烟丝生产技术：游离氨基酸；烟草；反相高效液相色谱法 C02膨胀烟丝生产技术是国际上70年代发展起来的一种烟丝加工新技术，它的发展受到了国家 和烟草企业的相当重视。氨基酸是烟草中的一类重要化学物质，烟草中的游离氨基酸在烟叶的烘烤、 陈化、调制及抽吸过程中均会与烟叶中的还原糖发生非酶棕色化反应，生成吡喃、吡嗪、吡咯、吡 啶类等杂环化合物，某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物，如苯甲醇、苯乙醇等u’。 其数量的多少和质量的高低会直接影响烟丝的内在品，烟丝C02膨胀过程(特别是松片回潮和过C02 冷端、热端)中，由于采用冷端C02低温浸泡、热端迅速升温膨胀等过程，改善了烟丝的某些品质， 提高了烟丝的填充能力，降低了卷烟焦油释放量，同时也使包括游离氨基酸在内的许多化学成分的 含量产生变化口1。研究CO：膨胀前后烟丝中游离氨基酸的种类和数量的多少及相对变化对于指导烟 丝加工工艺，提高烟丝的内在品质都有着重要的意义口】。本实验采用反相高效液相色谱法对C02膨 胀前后的游离氨基酸进行了定性、定量分析，为卷烟配方和加工工艺参数的优化提供理论依据。 1实验 1．1材料与仪器 中部SOJ切丝后、上部BO，切丝后等烟丝样品 试剂：Waters AccQ—Tag流动相A溶液；Waters 组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、精氨酸、酪氨酸、胱氨酸、缬氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、异亮 氨酸、亮氨酸和脯氨酸，均为生化试剂，购自中国医药(集团)上海化学试剂公司。 仪器：Waters 公司) 1．2 色谱条件 液相色谱柱：AccQ．Tag氨基酸分析柱(3．9×150mm，4um) 流动相A：Waters AccQ—Tag流动相A溶液按1：10稀释，B：乙腈，c：超纯水 恒流流速：1．0mlJmin 柱温：37。C 进样量：3．09L 荧光检测波长：激发波长250nm，发射波长395nm 淋洗梯度：见下表 1．3样品处理 将烟丝在烘箱中恒温40℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，筛下物为实验用烟样粉末，置于广 rnL mL锥形瓶中，加入2001al0．1mg／mL的内标溶液和50 口瓶中备用。准确称取2．0009烟末于50 AccQ一2A氨基酸衍生化试剂， AccQ．1衍生化缓冲溶液，涡旋搅拌器震荡lo秒，边震荡边加入201aL 加完震荡10秒，置55。C的烘箱衍生化反应10min后取出。将水解管中的溶液转移至微量色谱管中， 置液相色谱瓶中进行HPLC分析L4j。 1．4氨基酸的定性与定量分析 用标样色谱图、文献参照和标样加入的方法，通过对照保留时间进行定性，对氨基酸的出峰顺 序加以确认。采用内标法进行定量分析。即先根据氨基酸标样与内标物色谱峰的峰面积之比与相应 的氨基酸溶度，制作各氨基酸的工作曲线，求出相应的线性方程，然后由待测样品中的各氨基酸与 内标的色谱峰峰面积之比，求出相应氨基酸的含量。氨基酸标准溶液的色谱图及各成份标准曲线见 图1和表2f扪。 髁貊爨f阉／min 图1氨基酸标准溶液的色谱图(