DNA疫苗在寄生虫疾病防治中的应用研究.pdf

其他论文 溶酶原激活剂n卜-_PA)色谱复性中重点讨论了凝胶种类对1h-PA复性效果的影响，发现利用 seDhadex0．300凝胶效果最好．可使复性收率达到65％。利用SEC辅助蛋向质复性的过程中， 变性荆浓度是个不容忽视的因素。研究证明，变性剂在较高浓度(大于3mmol／L)下，可使蛋 白质必活变为具有一定二级结构的松散肽链。然而，在较低浓度下能够有效抑制变性蛋白质 分子问疏水相互作用，防止不可逆聚集体。 3．4．2固定化辅助因子色谱 固定化辅助因子色谱是指将某些对蛋白质复性有利的辅助因子固定在凝胶介质中。固定 化辅助因子色谱可认为是普通SEC的延伸，兼有sEc和辅助因子对辅助蛋白质复性的作用。 DoI砖报道了固定化GroEL色谱辅助蛋质复性的研究，对变性蛋白质的进料浓度、色谱负荷 量、流动相的盐酸胍浓度以及洗脱速度等进行了系统的考察，发现固定化GmEL有较高的稳 定性，在获得相同复性收率的条件下，复性能力是sEc的3倍以上。FershJ等将小分子伴侣瑚 定于琼脂藉凝胶，实现了对多种蛋白质的高水平复性。由于小分子伴侣不需要协同分子伴侣 及ATP的存在，操作成本低，具有很大的开发应用价值。 4复性蛋白质的检测 研究蛋白质的复性，必须建立适当的检测方法，以鉴定复性蛋白质的生化、免疫学、物 性以及蛋白变性态与天然态的区别，从而对复性方法进行评价和条件优化。主要有： (1) 凝胶电泳其中最为常用的是还原和非还原的sDs__PAGE．适于鉴定产物的纯度及复性蛋白 质的聚集状态； (2)光谱学方法主要有紫外光谱、荧光光谱和圆二色谱CD等，这些方法 可用来研究蛋白质分子复性过程中构象的变化，特别用于鉴定折叠中间体和复性蛋白质的构 象。(3)色谱学方法近几年人们利用蛋白质天然态和变性态色谱行为的差异来研究复性并 用于复性蛋白质的检测如天然态、变性及复性蛋白质、折叠中间体等sEc上色谱保留体积的 差异，反相高效液相色谱僻P—．HPLc)检测活性和变性重组人粒细胞集落刺激因子包涵体蛋 白的含量进而监测复性动态过程；(4)粘度与浊度蛋白质折叠状态不同，其溶解性存在一定 差异，从而影响其粘度的变化，因此可通过测定溶液的浊度(常以600nm或400nm的光吸收值 表示)来反映蛋白质聚集的快慢与程度；(5)免疫学方法利用酶联免疫、蛋白印迹法可以测定 不同状态蛋白质的抗体．抗原结合力的差异，从而说明其空间构象状态；(6)生物学活性及比 活性测定这是作为对最后的折叠状态评价的一个重要指标，一般是通过采用动物或细胞模 型直接测定复性蛋白质所具有的生物学效应来表示。 5展望 从近年国内外的研究成果分析，目前蛋白厦复性技术大多仍处于实验室研究阶段，与实 际工业化应用尚存在一定距离。随着人们对蛋白质复性本质认识的逐步深入和对各种复性方 法的不断探索和完善，加之各种先进仪器的使用，从实验室研究向工业化生产应用的进程速 度必将迅速提高。值得重视的是，复性色谱不但可实现蛋白质的高效复性，而且可对产物进 行部分纯化，是今后需重点研究的方向。同时，面对利用色谱辅助蛋白质复性研究的不断富 与成熟，应适时开展复性色谱过程放大和优化的理论与实验研究，使蛋白质复性色谱技l术 。 早日在生产实践中得到普及。 DNA疫苗在寄生虫疾病防治中的应用 中振维金宁一金洪涛李昌 (军事医擘科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室，长春130062) 寄生虫所致疾病种类多、分布广、危害大。但是由于寄生虫本身以及生活史复杂，在宿 主与寄生虫相互关系的进化过程中，寄生虫形成的免疫逃避以及对寄生虫生物学研究领域投 入不足等原因，使得临床上很少有针对重要的寄生人体和动物的寄生虫的预防及治疗性疫 1206 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十=次学术研讨会 苗。作为继减毒疫苗、基因工程疫苗之后的第三代疫苗，DNA疫苗大大推动了寄生虫疫苗 的发展。功qA疫苗是在上个世纪90年代发展起来的，、№lfr等偶然发现在小鼠肌肉组织内 注射质粒DNA后，质粒及其携带的基因可被小鼠肌细胞摄取，并在肌肉细胞内进行表达。 w-lIiarm等科学家进一步证实，直接给动物接种编码抗原的基因可使该动物获得对该抗原的 免疫力。 1 DNA疫苗的作用机理 DNA疫苗的作用机理还没有被完全的揭示，对于许多试