罗布麻总rna提取方法比较研究.pdfVIP

北方 园艺2014(11)：93～96 ·生物技术 · 罗布麻总 RNA提取方法 比较研究 李 苗 ，李 国旗 (1．宁夏大学 西北退化生态系统恢复与重建教育部重点实验室，宁夏 银川 750021；2．宁夏农业生物技术重点实验室，宁夏 银川 750002) 摘 要：以 Trizo1法、改进 SDS法及 RNA plantplusReagent试剂盒法提取 罗布麻 的总 RNA，并通过紫外分光光度法和凝胶 电泳检测对其提取效果进行 比较分析，以筛选 出罗布麻 总 RNA最佳提取方法。结果表明：Triz01法无法有效获得罗布麻总RNA，有较为显著的降解现象； 改进 SDS法提取的罗布麻 RNA总量较 少、浓度低，且试验重复性差；RNAplantplusReagent试 剂盒法提取的RNA质量好，纯度高，完整性强，可直接作为后续相关分子生物学试验材料。 关键词：罗布麻；Trizol法；改进 SDS法；RNAplantplusReagent试剂盒法；总RNA提取 中图分类号：S563．7 文献标识码：A 文章编号：1001--0009(2014)11一O093—04 罗布麻 (Apocynumvenetum L．)属夹竹桃科 (Apoc— 改进 SDS法l_9]、RNAplantplusReagent试剂盒法 3种 ynaceae)多年生宿根草本植物，具有极强的生态适应性， 比较常用的方法提取罗布麻总RNA，比较它们的提取效 分布于我国长江、淮河、秦岭、昆仑山以北及黄河中上游 果 ，从中筛选出罗布麻总RNA的最佳提取方法，为后续 地区。罗布麻为传统药用植物，其叶含有大量黄酮、三 反转录、基因克隆等分子生物学的相关研究奠定基础。 萜、有机酸、氨基酸等药用成份，具有增强免疫、消除抑 1 材料与方法 郁、通便利尿等作用，对高血压、高血脂病症有显著的疗 1．1 试验材料 效。此外 ，罗布麻纤维品质优 良，有 “野生纤维之王”的 供试材料采 自宁夏贺兰山农牧场罗布麻品种扩繁 美称，颇具经济开发价值_1]。 实验基地苗 圃。选取一年生 以上植株 ，采集植株茎尖、 目前，针对罗布麻的研究主要集中在生理生态、种 茎前端幼嫩叶片为参试材料。 植栽培、有效成分提取、药用功效评价等方面 ]，利用分 Trizol：异硫 氰酸胍与苯 酚均一混合 物，购 自 子生物学技术开展其基因资源挖掘利用方面的研究尚 Invitrogen公司。Tris—HC1(RNase—free，pH 9．0)：由 鲜见报道。挖掘利用罗布麻独特的基因资源，首先要提 Tris、DEPC水组成，用 DEPC处理 的 HCl调整 pH值， 取得到高质量的RNA。提取制备高质量 RNA样本是 购 自Invitrogen公 司。SSTE溶 液：1．0otol／INaC1， 基因克隆与转化、功能分析及相关分子进化研究的前 0．5 SDS，1reotol／LEDTA，10mmol／ITris—HC1。 提l3]，因而选用适宜的方法获得高质量的参试总RNA 其它试剂：l×TAE，1 琼脂糖，氯仿，异丙醇，无水 是开展这些研究的关键因素之一。由于组织细胞及环