IBDV超强毒GX899株的细胞适应毒和鸡体传代毒的致病性与VP5基因的比较研究.pdf

兽医部分 IBDV超强毒GX8／99株的细胞适应毒 和鸡体传代毒的致病性与VP5基因的比较。 朱秀同”崔治中一 (山东农业大学动物科技学院山东泰安271018) 0—5％之间。VP5基因序列分析表明GX8／99，忽，XZ，JL 的多4个氨基酸(MI．SL)，另外还有5处有规律的变异。克隆纯化的细胞适应毒在回鸡20代后对鸡的致病性无显著变化， 其、，P5基因也保持原有的变异。 关键词I传染性法氏囊病病毒；细胞适应毒；鸡体传代毒；VPS；传代；不同毒力。 Brusal BrusalDisease 传染性法氏囊病(InfectiousDisease，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious virulentinfectiousbmsaldisease 病病毒(vm virus，wIBDv)以来，该病毒迅速传播至亚洲和世界其他地区【1J。 使人们从分子水平去寻找与毒力变异有关的基因，但主要集中在VP2基因的研究上，本系列毒株经过对 其VP2高变区氨基酸的比较得出了VP2高变区大多数氨基酸的变异可能与病毒的致病性关系不密切，而 CEF细胞 种非结构蛋白，其生物学功能引起了人们的关注。本文通过对四株强毒株及～株超强毒GX8／99 致弱毒，SPF回鸡毒这一系列毒株VP5基因的比较，对VP5在IBDV毒力变异中的作用进行了分析。 1材料与方法 1．1试剂和毒株 RNA提取试剂盒，反转录试剂盒TaKaRa 连)有限公司，超强毒GX8／99，强毒冱株，)【z株，儿株皆为本实验室分离鉴定‘4，63并保存。 ·基金项目：国家自然科学基金重点项目“鸡群中免疫抑制性病毒多重感染及其与宿主的相互作用”(#31xr3mso)资助 ∞ 724 2006学术年会 1．2病毒传代 ～6周龄SPF鸡20代，每代都经20％三氯甲烷处理后用河南省农业科学院生产的IBDVELISA试纸条 (stripe)检测，确定病毒后一部分继续传代，一部分一20℃保存用作提RNA。 1．3致病性实验 10倍稀释 液，用20％三氯甲烷处理检测后做致病性试验，共分6组，5个试验组，1个对照组，每组20只3—6周龄SPF 鸡，0．3mlJ只点眼滴鼻攻毒，饲养于SPF隔离罩中，观察1周内的死亡情况，此实验分2次，实验2为重复。 1．4病毒RNA的提取 采用Triszol试剂法提取总RNA。 1．5引物的设计与合成 根据已发表的IBDV ，ICAG眦ACTCAG(册CI-一3 CCTCCT一3’，R：5’一 7，它们分别对应于VP5基因的起始密码上游和终止密码区，由上海生工生 物技术服务有限公司合成。 1。6 RT—PCR 以各自的病毒dsRNA为模板，P1为引物，参考TaKaRaPCR融(』岍)Ver．3．0试剂盒提供的体系： buffer inhibitor 0．25ta，AMV MS+2出，dNTPltd，10×RT1出，模板RNA4．25出，引物f：0．5td，r：O．5阻，RNase X buffer PCR iota， 0．5出，于42℃反应30min，然后990C5min，结束后加入PCR反应体系：双蒸水28．7