杭白菊脱病毒技术和多倍体的诱导研究.pdfVIP

中国药科大学大学硕士论文 前 吉 R 菊花为菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥头状花序。始载于 神《农本草经》，列为上品。本品具有疏风、清热、明目、解毒的功效，临床上广 泛用于治疗风热感冒、头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花等症。菊花的临床疗效确切， 为常用中药之一。在我国有悠久的入药历史，同时又被广泛用于保健茶饮。作为我 国大宗和重要出口药材之一，菊花社会需求量不断增大，但是菊花生产中长期以来 多采用无性繁殖方法，这必然导致病毒感染，造成菊花品种退化，药材的产量和质 量明显下降。因此进行菊花脱病毒、提纯复壮和优良品种的选育工作势在必行。鉴 于此，本教研室向江苏省科技厅申报了 “杭菊花脱病毒和优良品种选育”的课题， 并获得批准。本论文为此课题的一部分，主要进行了杭菊花的茎尖分生组织培养、 电子显微镜脱病毒初步检测、脱病毒菊花农艺性状比较、菊花多倍体株系的诱导和 鉴定、多倍体株系试管苗相关生理指标测定、田间株系总黄酮含量测定及其抗氧化 能力的比较，研究结果为进一步选育出高产优质的杭白菊优良品种奠定了基础。 中国药科大学大学硕士论文 摘 要 菊花为菊科植物菊ChrysanthemummorfioliumRamat.的干燥头状花序。菊花入药 历史悠久，为常用大宗中药材品种，其应用广泛，市场需求量大。为解决菊花因病 毒感染造成的品种退化问题、提高菊花药材的产量和质量，我们应用组织培养技术 对杭白菊进行了茎尖培养脱病毒及多倍体诱导的研究，并对诱导所得株系的化学含 量和若干生理指标进行了测定，研究结果为最终选育出高产优质、抗病能力强的杭 白菊优良品种奠定了基础，具体内容如下: 1.进行了茎尖分生组织培养脱病毒技术的研究，同时建立并优化了杭白菊组织 培养快速繁殖技术。结果表明:杭白菊试管苗在MS+6-BAO.4mg/L+IAAO.05mg/L的 培养基上繁殖的芽数多;杭白菊试管苗在1/2MS+IAAO.3mg/L+NAAO.10mg/L培养基 上有100%的生根效果。此外，移栽结果显示，试管苗在春秋季移栽到田间均有很 高的成活率。 2.采用电镜法对菊花中病毒进行了检测。有病毒的菊花试管苗视野中可以看到 大量杆状和球状病毒粒子，杆状长度为300nm左右，球状直径为29nm左右，与烟 草花叶病毒、黄瓜花叶病毒的图片对照一致。可初步断定本实验苗圃中的杭菊花主 要感染此两种病毒。对视野中未见病毒的菊花试管苗则进行组织培养加速繁殖。 3.对脱毒和未脱毒菊花的田间农艺性状进行了观察与测定。与未脱毒菊花相 比，脱毒菊花头状花序直径增加，舌状花花瓣数增多，叶片增大。显示出较强的生 长优势。 4.进行了组织培养条件下菊花多倍体诱导技术研究，结果表明:菊花丛生芽经 含2%二甲基亚枫和0.2%秋水仙碱溶液处理36h后接入培养基中诱导率最高，达到 10%。通过优化的根尖染色体显微鉴定条件，从鉴定出的21个多倍体株系中选择 了15个生长旺盛、茎叶粗壮的株系作为育种材料。 中国药科大学大学硕士论文 5.对菊花二倍体及多倍体试管苗的部分生理代谢指标进行了测定。结果表明: 不同株系生长率、叶绿素含量、APX,POD,SOD活性五个生理指标有较明显差 异，说明各株系间生理代谢水平不尽相同，因此在试管苗阶段，对株系进行前期筛 选是必要而可行的。 6.进行了菊花总黄酮提取工艺的研究，并测定了田间各株系的总黄酮含量。结 果表明:菊花总黄酮最佳提取工艺为:5克干菊花，加60mL75%乙醇80-90℃回流 120min。田间菊花多倍体株系总黄酮含量有较明显差异;脱毒菊花总黄酮含量高于 未脱毒菊花。 7.对田间菊花各株系花及叶清除轻自由基活性进行了比较。结果表明:各株系 的清除轻自由基能力有较大差别:各株系叶的清除轻自由基效果要优于花。脱毒株 系的花、叶清除轻自由基能力活性均强于未脱毒株系.测定结果为进一步进行田间 筛选，最终培育出高产、优质菊花品种奠定了基础。 中国药科大学大学硕士论文