放线菌酮对绵羊卵母细胞体外成熟同期化的影响研究.pdfVIP

巾国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十兰届学术研讨会论文集 放线菌酮对绵羊卵母细胞体外成熟同期化的影响 褚大鹏，王芬露，孙绪磊，成文敏，田见晖 (中阕农业大学动物科技学院／农业部畜禽遗传育种重点开放实验室，北京100094) 捅姜：本实验筛选了绵羊卵母细胞麓期纯培纂的放线菌酮(CHX)浓度，研究了CHX处理后减数分 裂进程的改变和CHX处理时间对减数分裂恢复能力的影响，还比较了体外成熟不同阶段用CHX处理 CHX处理24 对后裳发育能力的影响。结果表明：①20|lg／ml h后处于GV期的帮母细胞逝率与砖照 组差异不显著(PO．05)，但显著高于5“g／ml、10Hg／ml组(P0．05)；⑦CHX处理24h再正 h、16 常培养20h的成熟率显著高于正常培养12 低于对照组和24h组；④体外成熟不问阶段用CHX处理后体外受精的卵裂率、囊胚率也显著低于对 照组(P0。01)。因此，20瓣g／ml CHX簟较大程度地抒制卵母细胞减数分裂，CHX楚理詹努母细胞减 数分裂进程将加快，但影响其后期发育。 关键词：放线菌酮；卵母细胞；体外成熟；怒期化；绵羊 1引言 用于体外培养的卵母缨胞主要来源于屠宰卵巢或活体采卵，毽凑于穿巢上各个舞泡之阕的发育 状况不同，导致了卵母细胞也处于不同的发育阶段u吨1，从而使采集到的卵母细胞一卵丘细胞复合体 出现了不同步发育。而这很可能也是导致体外培养的胚胎发育能力较低的原因。有报道认为∞1，卵 母细胞斟期发育麓停滞对于提高其发育能力是至关重要的。因此将郛母缨脆进行阕矮纯处理，对提 高胚胎的发育能力具有重要的意义。通过同期化卵母细胞减数分裂的恢复，使所有收集到的卵母细 胞在体外成熟中同时完成核成熟，从而达到提高卵母细胞发育能力的目的。 通常使用的卵母缨胞减数分裂擗蔫l剂有敖线菌醺(C激、二甲氨蒸嘌呤(6叼淞P)、丁内酯(BLI) 等。放线菌酮是真核细胞蛋囱合成的一种抑制剂，能够影响GVBD的发生。被CHX抑制合成的这些骚 自质属于周期蛋白家族，对减数分裂的恢复有很大的影响。有研究[43表明，细胞周期蛋白B的合成 释积累是导致午卵母细胞减数分裂诙复的关键所在。丽CHX引起的减数分裂进程的停滞，无论是在 GV期还是其它阶段，当抑制去除后又能恢复减数分裂r5]。如猪卵母细胞经CHX处理后，再移入无 CHX液进行体外成熟时恢复减数分裂能力加强了[6]。牛卵母细胞经CHX预先处理后，发育能力没有 改交[7】。但经过体夕}受精篇，最终的囊胚率帮降低了。也有研究认为，通过延长成熟时闻，可以提 高囊胚率[8]。[O]但绵羊卵母细胞经CHX处理后发育能力状况如何网前尚未见报道。 本实验对绵羊卵母细胞阍期化处理的CHX浓度进行了筛选，同时研究了不同处理时间对减数分 裂恢复的影响，戳及处理后减数分裂遂程的改交，并且进一步探讨了CHX处理对后期发育的影响。 从而为今后研究羊卵母细胞成熟提供参考。 2。材料与方法 2．1实验材料 绵羊屠宰卵巢，薪鲜小尾寒羊精液。 2．2药龋试剂 磷合作顼嚣 作者简介：褚大鹏(1982一)，男，山东泰安入，硕士生，主要从事熬胎生物技术研究。田觅晖为通讯作者， Tel：010E-mail：tianjh@cau．edu．c11 343 巾蓬畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十麓届学零研讨会谂文集 本研究所震试剂除特殊说睨外均购于，Sigma公镯，配制各季申液体赝用水均为MilliQ过滤的超 纯水。 2．3实验方法 2．3．1卵巢的采集 绵羊的卵巢取自河北省廊坊市郊的屠宰场。将采集的郛巢放于盛有灭菌生理盐水酶保温桶中， 予4小时内带回实验室，温度保持在25--30℃。 2．3．2卵丘卵母细胞的采集 采用抽吸法采集卵母细胞，具体过程；将采集回来的卵巢用灭菌生理盐水清洗后，用装有2～ 3ml抽卵液的注射器抽取卵巢表面1～5mm大小的卵泡，然后将抽出的卵母细胞和抽卵液一并注入 16ml离心管中，待沉淀完全，再瘸捶卵液吸取底部沉淀著稀释最倒入一次性塑料平疆中。然后在体 视显微镜下捡取卵丘卵母细胞复合物(COCs)，选取A级(带有数层致密卵丘细胞)和B级(带有