HBx下调线粒体抗病毒信号蛋白MAVS来影响机体的先天性免疫研究.pdfVIP

摘要 摘要 乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV ）持续感染是诱发原发性肝细胞癌 （hepatocellular carcinoma,HCC ）产生的主要原因，X 蛋白（HBx ）在其中发挥 了关键性作用。HBx 基因是由乙型肝炎病毒基因组最小的开放读码框架（open reading fragment,ORF ）编码的，全长465bp ，编码 154 个氨基酸。线粒体抗病毒 信号蛋白（mitochondria antiviral signaling protein,MAVS ）是2005 年由四个不同 的科研小组同时报道的一个在先天性免疫反应中起接头作用的蛋白，其通过自身 的疏水跨膜结构域（transmembrane domain,TM ）定位在线粒体外膜上，是线粒 体中发现的第一个与先天性免疫相关的蛋白质。人类的 MAVS 基因位于 20 号染 色体的短臂 20P13 ，其 cDNA 全长为 1620bp，编码一个具有 540 个氨基酸的蛋 白质。MAVS 在调节机体的先天性免疫反应中具有多种功能，它可以激活转录因 子 NF-κB 和 IRF-3 ，这些有活性的转录因子协同调控 β干扰素基因的表达。 本课题通过免疫沉淀、免疫印记以及 GST-Pull Down 等方法发现了 HBx 和 MAVS 在细胞内和细胞外都存在相互作用，并且证明了 MAVS 是通过 TM 结构 域和 HBx 73-154 位氨基酸相互作用的，缺失 TM 结构域的 MAVS 或 73-154 位氨 基酸的 HBx 彼此之间就不能再相互作用。利用荧光素酶报告基因实验检测 HBV-DNA 和 HBx 对 N-RIG-I 、PolydAT 以及MAVS 诱导的 IFN-β-luc、NF-κB-luc 和 IRF-3-luc 报告基因转录水平的影响，结果发现 HBV-DNA 和 HBx 可以抑制由 N-RIG-I 、PolydAT 以及MAVS 诱导引起的 IFN-β-luc、NF-κB-luc 和 IRF3-luc 报 告基因转录水平的激活，并呈现剂量依赖性。通过对整个 β干扰素信号通路的研 究，我们发现 HBx 是以 MAVS 为作用靶点来影响 β干扰素的产生；通过荧光定 量 PCR 方法检测 β干扰素的 mRNA 水平，结果发现 HBx 是在转录水平上影响 β 干扰素基因的表达。进一步研究证明，HBx 可以影响内源 MAVS 蛋白的表达水 平，并呈现剂量依赖性；HBx ，一方面可以介导 MAVS 泛素化通过蛋白酶体途 径降解；另一方面通过缩短 MAVS 在细胞内的半衰期来影响 MAVS 的稳定性。 另外，在病毒感染的情况下，MAVS 与其上游信号分子 RIG-1 的相互作用随着感 染时间的增长逐渐增强，而当细胞内转染有 HBX 时，RIG-1 和 MAVS 的相互结 合随着感染时间的增长逐渐减弱。 I HBx 下调线粒体抗病毒信号蛋白来影响机体的先天性免疫 本研究首次从 HBx 对 MAVS 功能和稳定性的角度出发，阐明了 HBV 持续 性感染的可能性机制，为深入了解微生物感染后发生免疫逃逸的分子机理，抗病 毒治疗药物的研发打下了基础。 [关键词]：乙型肝炎病毒X 蛋白；线粒体抗病毒信号蛋白；荧光素酶报告基因； 蛋白酶体 II Abstract Abstract Prolonged infection with Hepatitis B virus(HBV)has been clearly recognized as a major etiological factor for hepatocellular carcinoma(HCC).HBx,a virally encoded protein of 154 amino acids,has b