昆明小鼠胚胎干细胞的分离培养试验研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十三脶学术研讨会论文集 昆明小鼠胚胎干细胞的分离培养试验 曹雷t2柏学进4张廷龙’赵兴’封纪武L3岳福杰’于进亮’李守军2董雅娟槲 1。莱阳农学院动物胚胎巾心，癯东毒岛266109；2．华南农避大学兽嚣学院，广衮广娥510642；3。宁囊大学，宁 蔑银川750031 摘要：本试验分离了三种不同的细胞制备饲养层，昆明小鼠胎儿成纤维细胞(KMmouseembryonic mousemarrow StemcellS，mMSC)， fibrobland，MEF)，昆明小鼠骨髓闰充质千细胞(KMmesenchymal marrow stem 牛骨髓阀充质予细胞(bovinemesenchymaleells，bMSC)，比较三种细胞制备的镯养 stem 层对小鼠胚胎于细胞(embryoniceell，ES细胞)分离培养的效果，观察集落在饲养屡上生长 和传代的情况，并对获得细胞的Es细胞样集落进行碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定和核型分析．结果 发现三种细胞所制备的饲养层均能得到ES细胞样集落，且均有促进Es细胞增殖以及抑制细胞分化 的作蒲，而且得到的Es样集落符合Es细胞的形态特征。本试验的三种饲养层的选择制备特别是mMSC 及bMSC饲养层的制备和使簏芳嚣s细胞的分离培养提供了可选择的新方法。 关键试l：昆明，j、鼠；饲养层；ES细胞；分离培养 stem cell，ES细脆)是铁桑椹艇、囊胚内缨脆圜或胎，L原始生蘧蜡中分 胚胎予细胞(embryonic 离，经体外抑制分化培养获得的细胞系u’。它是一种商度未分化的、具有多发育潜能性的细胞位，，可在 体外培养、扩增和建系，也可在适当条件下诱导分化为多种组织细胞砖1，还可与受体胚胎嵌合，形成嵌 ES细胞分离培养的体系一盘是研究的重点。迄今为止，分离壤养的方法包括：饲养层分离培养法， 条件培养基分离培养以及添加细胞因子等方法，但是还没有发现一种细胞因子或条件培养基能够替 代饲养层细胞的作用。已有的结论表明，MEF作为建立ES细脆系的饲养层是可行的、有效的。其 他饲养层，如人胚胎成纤维细胞及输卵管上皮细胞，均不能骜代MEF的作用【6l孔8．91。但是MEF细 探讨了MEF，鹾sc和bMSC兰种不同细胞饲养层分离培养昆明小鼠嚣S细胞的效果，旨在探寻适合ES 分离培莠薪的有效的培养体系。 l材料与方法 l，I材料 1．1．1试验动物 试验采用6～8周龄的昆明小鼠(购囱山东大学实验动物中心)，室温喂料，常规饮水。 1。1．2超排处理 选健康的性成熟昆明母鼠于4；00～4：30PM腹腔注射PMSG7．5rU很，48h后再腹腔注射hCG 7。5聊只，并与有生育能力的昆明公鼠按1：1合笼。次日9：00前观察母鼠阴道栓(乳自色或蛋黄色 胶冻状物)即定为妊娠0．5d。 I．1．3试剂 基金瑷髫：奎衮省钱秀中餐年科学家辩黟}奖磁基金(03菸129)、考岛市科技将才资韵 作者简介；曹臀(1980-)，山东济南人，在读硕士研究生，研究方向：胚胎工程及胚胎千细胞研究。 TEL：0532 料通讯作者：董雅娟，E-mail：etcenter@…126—,c—orn 巾瓣嘉艘蒜莲攀会动耪繁夔掣分会繁+三藩学术研讨会论文嶷 Buffered Hakko Phosphate Kogyo公 程研究所)。 王．2培养液成分 1。+2．1胎儿成纤维细胞(MEF)培养液 L。DMEF+10％FBS+100IU／ml青霉素+100IU／ml链霉素。 主。2．2塞S螽旎墙养液 5．6mg／L两性霉素B+1000IU／ml白m病抑制因予(LIF)。 1．2．3小鼠骨髓间究餍子细胞(mMSC)培养液 L-DMEF÷10％FBS+王％谷氨酰胺+10◇王u／嚣l青霉素÷lOOIU／ml链霉素。 1。2．4牛骨髓阕充质千细胞(bMSC)培养液 L。