第一章基因工程概论2.ppt

三、基因工程 （genetic engineering）;3.1基因工程的概念; 目前世界许多国家将生物技术，信息技术和新材料技术作为三大重中之重技术，而生物技术可以分为传统生物技术，工业生物发酵技术和现代生物技术。 现在人们常说的生物技术实际上就是现代生物技术。现代生物技术包括基因工程、蛋白质工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等五大工程技术。其中基因工程技术是现代生物技术的核心技术。 ;遗传学角度：一项遗传学技术;生物化学角度：重组载体的操作;基因工程（genetic engineering） 也叫基因操作、遗传工程，或重组体DNA技术。一般说来所谓的基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞中内，而能持续稳定的繁殖。 ;基因工程的准备阶段 在40年代确定了遗传信息的携带者，即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质，从而明确了遗传的物质基础问题。 在50年代揭示了DNA分子的双螺旋模型和半保留复制机理，解决了基因的自我复制和传递的问题。 在50年代末期和60年代，相继提出了“中心法则”和操纵子学说，并成功的破译了遗传密码，从而阐明了信息的流向和表达问题。 ;中 心 法 则; 由于基因工程是一门内容广泛、综合性的生物技术学科，在60年代科学发展的水平下真正实施基因工程，还存在许多问题，特别是在技术方面。生物有机体，尤其是具有复杂结构的真核生物，其DNA含量是十分庞大的。 ;; 每个基因都被认为是编码着一种蛋白质分子，所以人们一直十分重视研究单基因的结构与功能的关系。怎样分离单基因，以便能在体外研究其结构和功能的一系列问题，成为基因工程的关键所在。 ; 20世纪60年代末70年代初，限制性内切酶和DNA连接酶等的发现，使DNA分子进行体外切割和连接成为可能。 70年代中期，DNA分子的核苷酸序列分析技术问世。 这两项技术，使DNA的结构分析问题得到了根本的解决。 1972年首次构建了一个重组DNA分子，并提出了体外重组的DNA分子进入宿主细胞的过程，以及在其中进行复制和有效表达等问题。 在60年代还发展出了琼脂糖凝胶电泳和Southern转移杂交技术，这对于DNA片断的分离、检测十分有用，并很快被应用于基因操作实验。 ;理论上的三大发现： 发现了生物的遗传物质是DNA 发现了 DNA分子的双螺旋结构和半保留复制机理 发现了遗传信息的传递方式 技术上的三大发明： 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 基因工程的载体 逆转录酶的发现;基因工程的问世 1973年Cohen等首次完成了重组质粒DNA对大肠杆菌的转化，同时与S.Boyer合作，将非洲爪蟾含核糖体基因的DNA片段与质粒pSC101重组，转化大肠杆菌，转录出相应的mRNA。此研究成果表明基因工程已正式问世；并说明了质粒分子可以作为基因克隆的载体能携带外源基因导入宿主细胞，也说明了真核生物的基因可以转移到原核生物细胞中并在其中实现功能表达。 ; 1972年美国斯坦福大学的伯格第一次重组DNA获得成功.;基因工程的迅速发展阶段 自基因工程问世以的这二十几年是基因工程迅速发展的阶段。如果说20世纪八九十年代是基因工程基础研究趋向成熟，那么二十一世纪初将是基因工程应用研究的鼎盛时期。 ;3.3基因工程的基本内容;从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片段； 在体外，将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上，形成重组DNA分子； 将重组DNA分子转移到适当的受体细胞（寄主细胞），并与之一起增殖； 从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了细胞重组DNA分子的受体细胞克隆； 从这些筛选出来的受体细胞克隆，提取出已经得到扩增的目的基因，供进一步分析研究使用； 将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。 ;基因工程过程示意图;基因操作的基本步骤;提取目的基因;提取目的基因的方法（一）;提取目的基因的方法（二）;目的基因与运载体结合;将目的基因导入受体细胞并扩增;目的基因的检测和表达（一）;目的基因的检测和表达（二）;3.4 基因工程的应用 基因工程技术已经在医学、工业、农业等各个领域得到了广泛的应用。;基因工程大事记;1993 基因工程西红柿在美国上市 1997 英国罗斯林研究所 多莉羊 1999.9 中国获准加入人类基因组计划.负责测定人类基因组全部序列的1% 2000