组织培养的知识基础.ppt

第二章 组织培养技术的知识基础 一、组织培养的概念及评价 1.概念：Tissue culture P5 广义： 器官培养：器官原基或部分器官在离体条件下，使之生 存生长保持一定功能的方法。 组织培养：取自生物体的组织块，切碎后离体培养。 细胞培养：用一定方法，使组织解离成分散游离的细 胞，离体培养。 狭义： 即指细胞培养，指人工模拟体内环境，使离体细胞生 存，增殖，并维持一定的结构和功能的方法。 2、对组织培养技术的评价 ①在生命科学中广泛应用，经久不衰 从德国人Roux(1885)至今已有一百多年的历史 在生命科学各领域是一项最基础的实验技术，已经形成自己的理论体系。 应用范围： 生物基础：细胞代谢与生理机能，细胞增殖， 细胞遗传，细胞凋亡，细胞信号传导。 医学基础：生理、药理、病理、免疫、肿瘤、 血液学、遗传病。 应用研究：育种，药物研发，生物制品，细胞 工程，基因工程等。 ②组织培养技术的优点 可长期提供生活细胞材料实验观察，甚至生物母体已经死亡之后（细胞冻存） 可供培养的细胞种类十分广泛，所有细胞生物的体细胞，从胚细胞----成体细胞（正常与疾病） 便于配合使用各种实验技术，如：各种光镜、电镜、组织化学、同位素标记。各种物、化、生物因子作用等。 增殖迅速，可人为杂交，甚至远缘杂交。 可同时提供大量生物性状相似的研究对象，离体细胞某些遗传性状保持相对稳定，仍保持完整的基因组。 ③组织培养的局限性 细胞离体培养，模拟体内环境的局限性（神经体液调节、免疫调节、细胞间的互作）。 离体细胞发生变异不可避免，其生命活动规律不能与体内细胞等同，所以实验结果不可等同于体内实验。 细胞实验模型不能取代动物模型和临床实验。 二、离体培养细胞的生物学特点 （一）、离体细胞的差异和分化 1.差异：离体培养细胞 细胞在体内时的分化特征减弱，形态、机能趋单一化，如腺细胞分泌功能丧失；肾、肌、血管细胞均成纤维细胞化。 需进入持续增殖状态才能长期生存，所以衰退死亡加速。 某些细胞可能转化成不死细胞系，在适宜条件下获永生性。 （二）、离体培养细胞的形态学分类 离体培养细胞的分类不同于体内，首先据其在培 养器中的生长特征分成两大类：P7 1.悬浮型细胞：离体培养时，细胞不贴附于支持物上生长增殖，而是悬浮于培养液中，呈球形 2.贴附型细胞：细胞离体培养时，依赖于贴附培养器底壁才能增殖，依据形态特征又可分为： 1）成纤维型：细胞贴壁后与体内成纤维细胞形态相似的一类细胞。 形态:呈棱形或不规则三角形，细胞间隔不定，细胞质外伸突起，细胞核卵圆形，细胞增殖达一定密度后呈火焰状单层生长 起源：由中胚层分化起源的组织细胞，体内时形态各异，离体后形态归一。如：心肌细胞，平滑肌细胞，成骨细胞，血管细胞，肾细胞，输尿管细胞，生殖系细胞等 2）上皮型细胞 P7 图2-1 形态：贴壁后，细胞呈扁平，不规则多角形，圆形细胞核居中，细胞间排列紧密，间隔均匀。 起源：由内外胚层分化的组织细胞。如：消化道上皮细胞，肝、胰腺、肺气管上皮细胞、尿道和膀胱上皮细胞等。 肺泡Ⅱ型上皮细胞 3）游走型细胞：散在生长，活跃游动，变形。贴壁后不成片，在一定条件下，可类似成纤维细胞形，也可呈多角形，类上皮型细胞。 4）多形型细胞：指某些无规律性的形态特征的细胞。如：神经组织细胞。 游走型细胞 多形型细胞 （三）不同生长状态培养细胞的形态学鉴定 健康生长 生长不良 恶性转化 光镜下：伸展好 折光性弱 细胞皱缩折光性强 伸展差 折光性强 均质透明 细胞轮廓明显 核膜核仁轮廓明显 结构轮廓不明显 细胞质中有空泡 核糖体颗粒丰富 核质比例小 颗粒 核质比例增大 核仁小而少 2n体 核仁增多