组织化学概况.pptVIP

组织化学基本原理 1、化学反应 通过已知的化学反应，在切片上生成有色沉淀以显示其化学成分及其定位。 大多数组织化学方法属于此类，如酶组织化学 组织化学基本原理 2、类化学反应 少数组织化学方法的染色结果有特异性，但其机制不明 如卡红显示糖原、 Best胭脂红显示糖原；Mayer胭脂红显示糖蛋白 组织化学基本原理 3、物理学原理 运用物质的物理学特性来显示其存在 如苏丹——脂类；单胺类经甲醛诱发可产生荧光；组织X射线显微分析法，放射自显影，显微烧灰法等。 组织化学基本原理 4、生物学特性 利用生物大分子物质有抗原性的特性，用荧光色素、酶、胶体金等标记 免疫组化、亲和组化 组织化学基本原理 5、核苷酸互补原理 两条互补的核苷酸链可聚合形成稳定的杂交体 原位杂交技术 要求的基础 组织学、细胞学 显微技术 生物化学 分子生物学 物理学 组织化学技术的基本要求 1．具有高度的特异性 才能鉴别所显示物质的类属，正确分析实验 2．具有一定的敏感性 显示含量极微的物质，并弥补组织制备过程中化学物质及酶活性的丢失。 3．尽可能地保持组织和细胞生前的形态结构、化学成分和酶的活性。 为此必须选择适当的固定液和恰当的处理方法，如冷冻干燥、冰冻替代、恒冷箱切片、振动切片等。 组织化学技术 本次课掌握内容 组织化学技术的定义 组织化学技术的发展 组织化学技术的原理 组织化学技术的基本要求 组织化学技术是一门怎么样的课程？学习什么样的技术？主要用处是什么？ 调 查 题 1、组织学、显微技术中观察的切片是如何制作的？ 2、组织学的切片能观察到什么？如何观察细胞组织中特定的化学对象？ 组织化学的定义 组织化学（histochemistry）又叫细胞化学（cytochemistry）、显微化学 即在不破坏细胞形态结构的状况下，是运用化学、物理等技术手段对组织与细胞的化学成分、化学反应，及其变化规律进行定位、定性和定量研究的科学。 组织化学的课程地位 组织化学是介于细胞生物学、组织形态学、化学、生物化学和分子生物学等学科之间的一门边缘学科。 是医学、生物学科研过程的重要手段 注 意 1、组织化学的结果需要用显微镜才能观察到。 2、组织化学看到的不是化学物质本身，而是该物质经过化学反应后的产物 3、该产物的位置和数量可以代表该化学物质的位置和数量 免疫学与组织化学：将抗原、抗体的特异性与组织化学的可见性巧妙的结合起来，在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质。 分子生物学与组织化学：将碱基配对的分子杂交原理与组织化学相结合，产生了在核酸原有位置上进行的细胞内核酸定性、定位。 以上两学科的发展，推动了组织化学的进步，扩展的传统意义上的组织化学内涵，形成了多个分支。 组织化学的发展简史——建立 从1664年，Robert Hooke发现细胞起，细胞学和组织学开始建立和发展。 把化学技术与显微镜结合起来，应归于法国植物学家Raspail（拉斯帕伊, 1826） 组织化学的发展简史——建立 Raspail：在研究植物的受精作用时，首次发现 碘对淀粉的反应 蛋白质的黄色反应 硫酸对于蛋白质醛基和糖醛基的显色反应 利用指示剂显色测定细胞原生质的pH值 1830年Raspail发表了《在生理学中使用显微镜观察化学物质》的论著，从此标志着组织化学技术的开端， Raspail也因此被认为是组织化学技术的创始者 Vogel(1845年)和Perls(1867年)分别用硫化物和普鲁士蓝法显示铁； Millon的米伦法显示蛋白质(1849年)； Bencke(1862年)将甲苯胺蓝等苯胺染料用于组织学研究（苯胺染料技术发展到高峰的20世纪40年代才活跃起来） Heidenhain发现细胞的嗜铬反应(1870年)； Miescher用甲基绿显示细胞核的染色质(1873年)； Weigert(1884年)和Mar—chi(1892年)提出髓鞘染色法； Daddi(1896年)首次应用苏丹Ⅲ(sudan m)进行离体脂肪染色； Klebs(1868年)和Stuve(1872年)的过氧化物酶显示法： Ehrlich(1885年)发现细胞色素氧化酶。 Mann自1902年起，逐渐建立了完善的组织冷冻切片技术。 弥补了一般化学固定及石蜡包埋的缺点，可防止酶活性丧失。脂类、多糖类和无机盐的丢失等，推动了脂类、黏多糖及酶组织化学研究的发展。 这些都有力的支持了化学染色理论。 但是由于化学知识的贫乏和显微镜技术的停滞在一定时期限制了组织化学作为一个学科的发展。 直到20世纪30年代组织化学才复兴 1908年Macallum的《组织化学的方法和结果》 1929年Hertwig的《组织化学方法》 1949年Glick的《组织化学和细胞化