高三复习课基因工程.pptVIP

基因工程需要哪些工具酶呢？ 限制性核酸内切酶、 DNA连接酶、 载体、 基因工程需要哪些工具呢？ 限制性核酸内切酶、DNA连接酶、载体 考点 一 基因工程的工具? 1.工具酶与其他酶的比较 (1)五种DNA相关酶的比较: 　　　项目 种类　　　 作用底物 作用部位 作用结果 限制酶 DNA分子 磷酸二酯键 形成黏性末 端或平末端 DNA连接酶 DNA分子 片段 磷酸二酯键 连接DNA 分子片段 　　　项目 种类　　　 作用底物 作用部位 作用结果 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 形成新的 DNA分子 DNA(水 解)酶 DNA分子 磷酸二酯键 形成脱氧 核苷酸 DNA解旋酶 DNA分子 碱基对间 的氢键 形成单链 DNA分子 (2)限制酶与DNA连接酶的关系(如图): ①限制酶不切割自身DNA的原因:原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。 ②DNA连接酶起作用时不需要模板。 识别序列？ 识别位点？ (2)DNA连接酶——“分子缝合针”: ①作用:将切下来的________拼接成新的DNA分子。 ②种类 (3)基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” ①种类:_____、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 能_________ 有一个至多个_______________ 有特殊的_________ E?coli DNA连接酶：只能连接_________ T4 DNA连接酶：既能连接_________，又 能连接_______ 黏性末端 DNA片段 黏性末端 平末端 质粒 ②质粒特点 自我复制 限制酶切割位点 标记基因 PCR技术—聚合酶链式反应 原理： 前提： 条件： PCR扩增仪 DNA双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物（一般为DNA引物） 耐高温DNA聚合酶(Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制 利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术扩增过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 断裂，形成_______ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物 与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 反转录 合成 1）反转录法： 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 2）通过蛋白质工程合成DNA法 ： 基因表达载体的构建 ——核心、关键 1、导入植物细胞 ①农杆菌转化法 :表达载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞 ②基因枪法 ③花粉管通道法 将目的基因导入受体细胞