梨分子标记研究进展研究.pdf

梨分子标记研究进展 董祯 张玉星。 王国英 申连英 张江红 (河北农业大学，保定071001) 摘要：本文就分子标记在梨树种质资源研究上的应用进展进行了综述，对当前梨树研究领 域中分子标记应用存在的问题进行了分析，并对其前景作出展望。 关键词：分子标记；梨树；种质资源 DNA分子标记是继形态标记、细胞标记、生化标记后发展起来的，是以检测DNA碱 等人第一次利用RFLP(RestrictionLength Fragment 性)进行腺病毒血清型突变体基因组作图，开创了广泛利用DNA分子水平上的多态性进行 生物进化、分类、基因定位和遗传图谱构建等方面研究的新阶段。常用的分子标记技术有以 DNA的直接体现，无表型效应；(2)源自基因组DNA的差异，标记位点遍及整个基因组； 应，与不良性状无必然的连锁遗传，不影响目标性状的表达等。 梨属于蔷薇科梨亚科梨属植物。世界梨属植物约有60余种[1]，我国是梨属植物的起源 中心[2}，蕴藏着丰富的种质资源，原产我国的梨属植物有14个种。现有18个种，7个亚 种，栽培品种约有3000多个[3]，这为有效的发掘和筛选适合育种需要的种质、培育优良经 济性状的新品种提供了宝贵的资源。我国果树工作者对梨进行了大量的研究，但从分子水平 研究梨树的报道尚不多见。本文综述了近年来应用DNA分子标记技术进行的梨树研究工作 的进展及存在问题，并展望了分子标记技术在梨树研究中的应用前景。 1应用于梨树研究的分子标记技术 与水稻、小麦、番茄等作物相比，分子标记在梨树研究中的应用起步较晚。目前，在梨 DNA)、1S— 树研究中主要应用的分子标记技术有：RAPD(RandomAmplifiedPolymorphic SR(Inter-SimpleSequenceRepeats)、AFLP(AmplificationFragmentLengthPolymor— phism)。 *为通讯作者。 梨分子标记研究进展217 1．1 RAPD 基左右)作为PCR的反应引物，对基因组DNA进行扩增，由扩增产物的多态性而显示基 因组的多态性的检测技术[5]。RAPD是一种基于序列的多态性，由于可以在没有任何分子生 物学研究基础的情况下对某一物种进行遗传多样性的研究，相对其他标记来说经济简便， DNA用量少(ng级)，而且避免使用放射性物质，自创立以来，已广泛用于基因定位、遗 传图谱构建和遗传多样性分析等领域，是一种应用前景广泛的分子标记方法。因而近年来在 的果树中，一般认为，通过RAPD分析可以达到对果树不同种质资源进行鉴定和分类的要 求，具有一定可靠性[121。 然而RAPD技术也有其不足，首先RAPD提供的是显性标记，它不能区分同一位点扩 增的片断是纯合还是杂合的；其次，RAPD再现性差，需要对不同物种做大量的摸索工作， 以确定每一物种的最佳引物和反应条件。只有反应条件标准化才能提高RAPD标记的再 现性。 1．2Ⅱ洛R et 由1—4个碱基组成的串联重复和几个非重复的锚定碱基组成，引物末端设置的非重复锚定碱 IssR产物的多态性更为丰富。但有些IsSR引物可能在特定基因组E圩叮A中没有配对区域而 无扩增产物。 规律，多态性较好。此外，这一方法快捷，简便，技术要求不高，很容易操作，而且成本低 廉[24I，在遗传图谱的构建和抗性基因的标记上将有很好的应用前景。 1．3 AFLP ． 合的产物。它克服了RFLP技术复杂、RAPD稳定性较差的缺点，又兼具两者之长。具有 稳定性强、分辨率高的特点，被认为是一种较为理想的、高效的分子标记技术[15J。目前已 广泛应用到农作物、林业和园艺作物的研究中。 AFLP技术的基本原理是通过对基因组DNA的限制性酶切片段进行选择性扩增而揭示 其多态性。首先将基因组DNA经限制性内切酶双酶切后，形成长度不等的限制性酶切片 218梨科研与生产进展(三) 段，然后连上接头形成带