两株菲降解细菌的筛选、鉴定及其降解特性的研讨.pdf

持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 两株菲降解细菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究 赵和平，郜洪文 (1．同济大学污染控制与资源化国家重点实验室，环境科学与工程学院，上海200092；) 摘要：从上海炼油厂石油污染土壤中分离纯化到两株能以菲为唯一碳源和能源生长的降解菌 株。两菌株均为革兰氏阴性杆菌、好氧、不形成芽孢，分别命名为EMSLl、EMSL2。根据生化实 列测定工作正在进行中，该工作可以从基因水平上对筛选菌株进行分类学鉴定。菌株EMSLl为嗜 sp．)，种尚不能确定。 麦芽黄单胞茵(Stenotrophomonasmaltophilia)；EMSL2为克雷伯氏属(Klebsiella 实验证明两菌株均具有较好的菲降解力，其中EMSLl茵株在试验的12天内，对菲的降解可达92％， 明显强于EMSL2菌株对菲的降解能力，后者在实验时间内，对菲的降解效率达到73．2％。 关键词：多环芳烃；生物降解；菲；降解茵 1．引言 多环芳烃(PAHs)是一类广泛分布于海洋环境中的重要污染物，主要来源于人类活动和能源利用 过程，通过地面径流、污水排放及机动车辆等燃料不完全燃烧后的废气随大气颗粒的沉降进人海洋 沉积环境中。由于多环芳烃的潜在毒性、致癌性和致畸诱变作用，通过生物累积及食物链的传递作 用，对海洋生物、生态环境和人类健康具有很大的潜在危害，从而引起了各国环境科学家的极大重 视[1．3】。美国国家环保局在20世纪80年代把16种未带分支的多环芳烃确定为环境中的优先污染物， 我国也把多环芳烃列入环境优先控制的污染物黑名单中。研究表明，微生物降解在该污染物的迁移 转化乃至最终消失的过程中占有重要地位，是多环芳烃从环境中去除的最主要途径。虽然大量研究 报道了许多细菌、真菌和藻类具有多环芳烃降解能力，但对微生物降解与多环芳烃毒性去除间的关 系还知之甚少，特别是海洋微生物对多环芳烃的降解和毒性去除关系尚未见研究报道【4．81。本文 报道石油污染土壤中两株菲降解细菌菌株EMSLl和EMSL2的分离纯化、生理生化鉴定和部分长度 16srDNA序列的分析，在系统发育中的地位以及菲降解的特性，以期为菲污染的生物修复和治理提 供一些基础理论资料。 2．材料与方法 2．1材料 土样采自上海炼油厂石油污染土壤。将少量土样加入100mL加菲无机盐删M)培养基中，30℃、 200rpm摇床培养8d’吸取lmL转接至新鲜培养基，连续富集。转接四次后，用接种环取少量富集 培养液，在加富MM培养基平板上直接划线分离并纯化。将纯化后的菌落再转接至加菲MM培养 基中，摇床培养以验证其是否具菲降解能力，选择降解力强的菌株重新分离纯化【4】。 无机盐(M旧培养基(g·L。1)：Na2HP04·2H20 8．59，KH2P043．09，NaCl0．59，NH4CI1．09， O．59，CaCl2 CuS04 MgS04·7H20 14．7mg．微量元素： 0．4mg，KI1．0mg，MRS04·H204．0mg， ZnS04-7H20 4．0mg，H38035．0rag，H2M004-2H201．6mg，FeCl3·6H202．0mg．NaOH调节pH至7．0，菲 加入MM中，使终浓度为0．025％。 加富MM培养基：在MM培养基中分别加入1％营养琼脂和1．5％琼脂，用于菌株的平板培养 和斜面保存。 2．2试剂 序列扩增的引物由上海生工生物工程技术服务有限公司完成。 217 持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 2．3生理生化实验 菌株鉴定的生理生化实验参照文献[10一12]进行。 2．4抗性实验 抗生素敏感性实验采用管碟法。 2．5 TEM形态观察 透射电镜观察菌株微结构形态。 2．616srDNA的PCR扩增、序列测定及系统发育分析 物为一对通用引物。正向引物：57-AGAG”rTG衄1CCTGGTCAG一3’(Escherichiacoli对应位置为8-27)， 反向引物：5’一A