电化学与化学发光免疫传感器与细胞膜受体原位免疫分析新方法研究.pdf

电化学与化学发光免疫传感器与细胞膜受体原位免疫分析新方法 塑埕筮 (南京大学化学化工学院，生命分析化学教育部重点实验室，南京 210093) 近年来，我们的研究工作涉及免疫传感器的研制与细胞在仿生界面上的固定化技 术、细胞膜受体原位免疫分析新方法的建立等，取得如下研究进展。 1．电化学免疫传感器和肿瘤标志物的免疫分析新方法研制成用于免疫检测的化学 修饰电极和6种免疫传感器，并发展了实用的一次性免疫检测芯片，构建了8种检测肿 器制备简单、性能稳定、样品用量少，具有满意的准确度和制备重复性．无需洗涤、分 离等步骤。 1)利用硫堇修饰金电极，结合酶联免疫分析方法，建立了血浆中CEA的快速检测方 法，检测下限为0．2 ng／mL，测定过程无需媒介体的加入，易于微型化。 2)将硫堇和HRP标记CEA抗体固定在玻碳电极表面，利用CEA抗原与HRP标记 CEA抗体免疫结合后产生的位阻效应部分或掩蔽标记HRP酶对I-1202氧化硫堇的催化效 率，通过测定催化电流的降低，无需分离、洗涤．可快速测定0．5．167ng／mL的CEA，检 测下限为0．1 ng／mL。该方法降低了定成本，缩短了分析时间，可望用于临床免疫分析。 3)利用Ti02溶胶凝胶气相沉积法将CAl99固定在石墨电极表面制备CAl99的新型 U／ml 电化学免疫传感器，结合竞争免疫反应，以儿茶酚为电子媒介体，建立了测定3～20 CAl99的免疫分析方法。用于胰腺癌病人血样检测具有很好的准确度。 4)利用n02溶胶凝胶膜将CAl25抗原固定在玻碳电极表面，标记在CAl25抗体上 的HRP酶在发生免疫反应后在ri02溶胶凝胶膜上表现出稳定的直接电化学行为，发展 U U 了新颖的CAl25快速安培检测方法。线性范围2～14mL一，检测下限为1．29mL-1。 表现出很好的准确性和精确性及制备重复性，为卵巢癌的临床诊断和免疫分析发展了新 方法。 5)利用ri02溶胶凝胶膜将hCG抗原固定在玻碳电极表面．标记在hCG抗体上的HRP 在发生免疫反应后表现出直接电化学行为，发展了新颖的hCG快速安培免疫检测方法， 检测下限为】．3mlU／ml。该hCG免疫传感器表现出很好的准确性和精确性及制备重复性。 edu．cn，Tel：025 ’通讯联系人：鞠规先，E,mail：hxju@nju 14 6)利用金胶．接枝壳聚糖膜固定hCG，结合竞争免疫反应，以邻一苯二胺为电子媒介 mlU，ml。接枝壳聚糖膜上金胶的存在， 体，建立了hCG的免疫分析方法，检测下限为0．2 使传感器具有很好的稳定性，检测限比文献报道低1个数量级。 7)利用金胶纳米粒子．噩02溶胶凝胶复合物膜将HRP标记hCG抗体囿定在玻碳电极 表面，金胶的存在使固定的蛋白质均匀分散而不凝聚，标记HRP表现出直接电化学性质， 免疫反应使电流降低，据此发展了新颖的hCG快速安培免疫检测方法。检测下限为0．3 mIU，ml。 8)以丝网印刷电极为基底电极，通过壳聚糖膜将HRP标记AFP抗体固定在电极表 面，利用免疫反应后HRP酶活性由于空间阻碍使电流的降低，发展了实用的一次性AFP 免疫检测芯片，线性范围为0．20和20_150 ng，HlL。该传感器测 n∥mL．检测下限为0．74 定过程简单，易推广，可用于临床诊断。 2细胞膜受体原位免疫分析新方法利用金胶．壳聚搪膜具有的很好生物兼容性与亲 水性将K562，阿霉素细胞固定在玻碳电极表面，原子力显微镜表征结果显示，吸附在壳聚 糖上的纳米粒子可以有效地阻止细胞在电极表面的变性．肿瘤细胞可在该膜表面存活48 超过小时。通过有效的表面免疫反应，发展了一种原位检测白血病细胞K562，ADM表厩 P．糖蛋白和溶液中细胞电量的电化学免疫分析新方法。在优化的条件下，电化学