成瘤性减弱的空间诱变B16细胞株的生物学特性研讨.pdfVIP

成瘤性减弱的空间诱变B16细胞株的生物学特性研究 郭宇鹏 向青徐梅耿传营 房青徐波 李红艳 陈志华 杨鸿生唐劲天 清华大学。北京．100084I 中日友好医院临床医学研究所，北京，100029； 昆明医学院第一附属医院．云南昆明市，650031 关键词肿瘤学空问环境B16细胞谤竟 一、引言 空间细胞生物学研究是人类认识及征服太空的必由之路．空问技术的进步，为研究空间环境对细 km以上的外层空间，是与地面 胞结构和功能的影响等问题提供了可能及技术平台．距地球表面100 完全不同的特殊环境．存在着宇宙射线辐射、高能重离子辐射和长期微重力等诱变因素．众多国内外 文献报道；搭载于空间飞行器中的微生物、植物种子、植物体、体外培养的细胞和动物均会产生各种各样 的变化‘Ⅵ】．一些中国生物科学家已经利用本国的空间技术进行了一些植物种子、菌种和体外培养细 胞的空阃搭载诱变实验，至今有70多种生物及种子被搭载。获得了一些世界首创和领先的结果．其中 水稻种子的搭投实验返地后经过种植选育从中筛选出了形状稳定的优良品系．并且从分子水平证明了 不同的水稻突变体与原种DNA之间存在不同程度的多惫性差异n“]． 在上述研究基础上，本课题组进行了无源搭载肿瘤细胞诱导变异的实验．从2002年底“神舟四号” o细胞株)[‘】．本研究 胞株进行了初步的筛选，找出了1株致瘤性减弱、免疫原性可能提高的细胞株(8 应用一些形态学、细胞生物学和分子生物学实验技术对筛选得到的可疑阳性细胞株进行检测．观察其各 种指标变化，希望能找到肿瘤免疫原性改变的强化特征，为今后强化肿瘤细胞免疫原性及制备新型目中瘤 疫苗打下基础． 二、材料与方法 (一)激光共聚焦显微镜观察细胞骨架 两天；PBS洗2追，4％多聚甲醛室溢固定20minl 液[60mmol／L(PlPEs)。25姗oI／LHEPEs。10衄oI／LEGTA，2衄oI／L ·50· sP2 Confocal Laserscanning Micr08cope 片，使用Lei∞LCS LCS软件采集和处理图像． (二)MTT法测定83细胞和对照细胞体外培养生长曲线 法测定OD值．绘制生长曲线，弃去原培养基每孔加人台O．5mg／mI 轴绘制细胞生长曲线． (三)FCM测定细胞周期分布 化．PBS洗两次．70％乙醇固定．Pl染色．流式细胞仪检测．细胞周期分布百分比使用SPSS11．O软件 包应用独立样本f检验对8’组和对照组均数分别进行比较。 bag一3基因的表达情况 1．Trizol法提取实验细胞RNA 一70℃冰箱中． 2．mRNA逆转录 离心管中加人2plmRNA，1弘loIigo(dT)和7pl DEPC 于冰上冷却；随后加入5pl AMV、lplRnasin和lI^I 5×扩增缓冲液、5—4种dNTP混合液、3pl 一步实验． 3．引物 引物由PrimerPremier5．0设计．委托上海生工生物工程技术服务有限公司合成，详细情况见表1． 4．聚合酶链反应 PCR反应体系中包括{0．2mIPcR扩增离心管中加 增出内参照和目的片段产物。具体步骤如下：20弘l 入11．5弘lDEPC水、1．2弘lMgck、2严l10×扩增缓冲液、o．4pl 目的片段引物1、1弘l目的片段引物2、o．8plp—Ktin弓f物1、o．8pl DNA 引物至PCR反应体系进行