孵育代谢稳定性的高通量LC-MSMS分析.PDFVIP

孵育代谢稳定性的高通量LC-MS/MS 分析 Matthew Berube, Thermo Fisher Scientific 前言 药物开发过程中有大量的化合物需要筛选，在其中的药物发现阶段通常会用到 高通量筛选(HTS)分析。化合物的优化和样品的分析是制约高通量筛选的因素。本 研究阐述了用TurboFlowTM 技术推动的Aria TLX-4 multiplexed HPLC 系统解决质谱 优化和样品分析等问题，以及 Thermo Scientific 推出的用于化合物优化过程的 QuickQuan 软件。 目标 展示在药物发现中用QuickQuanTM 全自动优化软件和Thermo Scientific 的Aria TLX-4 系统如何急剧的增加样品通量。 实验条件/方法 用八种化合物来对比新的化合物优化法则和手动优化的结果。定量研究时，每 一种化合物均从1 ng/mL 到1000 ng/mL 的浓度范围内作标准曲线。第一份样品注入 单通道HPLC 系统，第二份样品注入AriaTM TLX-4 系统四个通道中的一个。将色谱 峰积分，用分析物的峰面积与内标的峰面积比来进行线性回归运算，如图 1 所示。 图1 序列见结果汇总表，结果可以在Qual 或者Quan 页面查看。 结果与讨论 分析结果的精确度和准确度本质上是对等的。两种方法的准确度都是在理论值 的 10%偏差以内，精确度为相对标准偏差低于 10% 。用 Thermo Scientific 的 QuickQuan 软件和Aria TLX-4 系统后样品通量显著的增加。用手动的化合物优化方 法进行十种化合物的优化需要操作人员全神贯注的进行大约2 个小时，而用新的自 动优化方法仅仅只需要 13 分钟，几乎能省下 10 倍的时间（见图2 ）。样品在一根 分析柱上用HPLC 方法运行需要48 小时，而用TurboFlow HPLC 方法在四个平行的 LC 通道仅仅只运行 12 小时，意味着4 倍的时间节省（见图3 ）。整个过程中样品 通量增到4 倍，并且最小化了用户干预。 结论 Aria TLX-4 HPLC 系统，QuickQuan 软件和Thermo Scientific 的TSQ Quantum Ultra 三重四极杆质谱仪的完美结合，显著的增加样品通量，且无须牺牲数据质量。 图2 QuickQuan 全自动化合物优化和手动优化的比较。QuickQuan 将优化时间从2 小时缩短至16 分钟。 图3 数据采集流程：采用QuickQuan 软件，建立的序列表自动导入Aria 系统软件 用于数据采集，数据处理由QuickQuan 自动操作。采集速率比传统的LC 系统提高 到4 倍。