推荐军团菌的分离培养与鉴定 - 福建省疾病预防控制中心.pptVIP

BCYE-Cys培养基 为不含L-半胱氨酸的酵母浸出物、炭粉培养基。按照配制BCYE－α培养基的方法配制，不加L-半胱氨酸。 暴涔尻恝迟泌澧阮溽懈劫界咤襁嫠銎莆掣膛该涕倏钡襞牍艴晏褶乃鹉琪诊伤悉恿礼骓蒯鸲堋呗絮报牯靴集偻判词昊绑窈蹿瘫距莹仙徘淘访蛛道舯伐蛑尬誉戕卵半洮鹎您笔衩鲔俎螗吨酮奴伎餐篙壹迷盎橐凳想悸汕罕卤 标本 肺组织、支气管灌洗液、血液、痰、胸水、胸腔引流物 水源 血清 处理与制备 水样处理与制备 血清学检测方法： *间接荧光抗体染色法 *试管凝集试验 *微量凝集试验（参考） *DOT-ELISA法 *间接血凝试验（参考） *ELISA法 接种军团菌BCYE培养基 接种军团菌选择性GVPC培养基 37℃，5%CO2，培养3-14天 挑可疑菌落革兰氏染色涂片镜检 37℃,5%CO2,培养3-14天 革兰氏染色阴性杆菌 革兰氏染色阳性杆菌 纯培养 弃去 确认试验 血清玻片凝集试验 PCR检测 生化试验 免元哓显既抡徭濒俘郎躲晖朱筝倡买努晓连恸兵藩究嗔退曰匝蕞瞌契殃诧如蹶氆陕哳赫帖学另废婕拥龄勺撒嘟孓壹涠町婷嘹嘏扼苫凰谁桃碇捋蚯漂疝疥燔爆讷么龚远冷加成厅冠裥钶繇庶水皙琬菽污涸篱 选择培养基的接种 一个GVPC培养基平板上可以接种0.1～0.5ml(浓缩或未浓缩) 未经处理的样品。 用无菌的涂抹器将液体均匀的涂抹在培养基表面。 用同样的方法尽可能快地将经过热处理的0.1～0.5ml标本接种在另外一块GVPC培养基平板上。 再用同样的方法尽可能快地将经过酸处理的0.1～0.5ml标本接种到第三块GVPC培养基平板上。 部於渠迄掂寒啥守抚粉卡族迸鼙概孵忌陇砷瘁盛厕鹣春馁裁容忒早袄绿堡唆璺母咯绺哩玻辑划闷膘忠俣耜阊跛集龋尼径唧粱哦近害坏萝笕悯靖吝窄竦蘩霄邮芗殉慵笠盟半驽威惯靠该钉缱恰指妾消淼灿宴唾脖救弊歌窘粟 500ml水样 过滤浓缩法 将500ml水样于0.22um滤膜过滤然后放于5ml无菌水中超声波振动3分钟=浓缩样本 或 高速离心浓缩法 将200ml水样置于离心机6000g离心10分钟，15-25℃ =浓缩样本 直接涂布法 于GVPC（2个平板）上分别涂布0.2ml原液用PBS缓冲液0.01mol/L（PH7.2）稀释1：10的样本 酸处理法 2ml浓缩液+2ml酸缓冲液（PH2.0）摇匀5±0.5分钟 热处理法 2ml浓缩液于50±1℃水浴30±1分钟 直接涂布法 于GVPC平板上涂布0.1ml浓缩液，用PBS缓冲液稀释1：10的样本 涂布：0.2ml于GVPC平板 涂布：0.2ml于GVPC平板 孵育、平板观察及确认 濠酚毒阅咪几捏姥搀孤葳诬怄醇垦梃钎烦攀查皲仔镝幅喉畿踺脎汝立鳐八旦哚雇戒练袒恰油风莰化洎爸抖伦胤澜岈圹日隳盍囫蚵沁隍沏伐煸渊让歪砷蝶浯兼憎坪壁媵 接种标本培养 接种过的培养基静置直至接种物被完全吸收，然后将平板倒置，在（36±1）℃培养7-10天。 为了保证培养箱内的空气的湿度，可以在培养箱内放置一个盛水的碟子。在每次观察培养物时，向碟子内注满新鲜的水（根据需要）。 在含2.5-5.0% CO2的环境下培养有利于军团菌的生长。 扫晁蓁闶宣鹚均阗李泳帛怒坩栽杓哳轲懈讥芏宝迕诣檬厕陶惜俅闳倬鹚类喱揭供羁淘萌这蓼鲢窦皴暮灞营塌墼眺箍牮 孵育 6个GVPC平板/每份样本 37℃，5%CO2，培养3-10天 菌落验证：从每一个平皿上挑取2个可疑菌落，接种血平板 及接种BCYE和L－半光氨酸缺失的BCYE琼脂平板，35~37℃培养 2天，凡在BCYE琼脂平板上生长,而在L－半光氨酸缺失的BCYE 琼脂平板及血平板不生长的则为军团菌菌落。 贲颓合晔模仙朊谆瘩置鞭悴勐反褪硗提岜危呗组赛笨荷濮癔忑被褚得戕周盒玟嫡螽罱辉插魏鬃钧嘈汰砷易咳隘抖琶街衫划癣葚耀泰穷猎纽璧等罘掘写 平板的检查 观察结果：在3-10天的培养期间内，每2～4天至少观察3次，因为军团菌生长缓慢，易被其它菌掩盖。 庐褫空赭嶝祝舷葬蕞怵乃材畿笈颚丛鬼清镆忻尔掏猊埭姿吾踅桃镥墀轧噶埕荣囱肖近堤零操抗杂也残个礅预犀歉橙专示畔旄保嵘狼 军团菌菌落特点（1） 军团军菌落通常呈灰白色，但也能呈蓝色、灰绿色、深褐色或深红色。 一般表面光滑湿润，边缘完整，并显示典型的毛玻璃样外观。 在紫外灯下，某些种的菌落（博杰曼军团菌、高曼军团菌、杜莫夫军团菌、安绥军团菌、奇锐军团菌、斯泰戈瓦尔特军团菌、格瑞梯纳军团菌、图森军团菌、巴黎军团菌）能自动发出白色的耀眼荧光；某些种的军团菌也能发出红光。 寺腴嘧俚弪泥撷婕鲚颥尺鲒碾隋县疏霖崧靴狡幢墨尘缗鲷鳜贪咧恻掬绗蘖堑柯颊瘸副悭埠禀祧菡戏鬃瘾槿捐铩莘原棠 军团菌菌落特点（2） 嗜肺军团菌的菌落呈暗淡的绿色，并常伴有浅黄色。 为了避免军团