流行性乙型脑炎prM蛋白剪切位点突变的prM—E蛋白表达细胞系的建立研究.pdfVIP

第35卷 第3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vol_35．No．3 2013年 3 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Mar． 2013 doi：10．39698．issn．1008—0589．2013．03．05 流行性乙型脑炎 prM蛋白剪切位点突变的 prM—E蛋 白表达细胞系的建立 李业南，陈振师，步志高，华荣虹 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150001) 摘 要：为建立稳定共表达乙型脑炎病毒(JEv)完整M 前体蛋白(prM)和E蛋白的BHK-21细胞系，本研究在 prM 蛋 白furin蛋 白酶剪切位点编码基 因中引入突变 ，将突变后 的prM 基 因克隆于质粒 中构建重组表达质粒 pCAG．JEV．prM(R89A)E。将重组质粒转染BHK-21细胞，转染48h后细胞用含G418的选择性培养基选择培养， 进一步经细胞克隆纯化制备表达剪切位点突变的JEVprM．E蛋白的稳定细胞系。经 IFA和westernblot鉴定表明， 该细胞系能表达JEVprM与E蛋 白，所表达的prM蛋白未发生剪切 ；细胞经多次传代后仍能够稳定地共表达 prM 与E蛋 白。该细胞系的建立为研究prM蛋 白剪切对 JEV粒子形成的影响以及亚单位疫苗的制备奠定了基础 。 关键词：流行性乙型脑炎病毒；prM蛋白；蛋白剪切；细胞系 中图分类号：$852．65 文献标识码：A 文章编号：1008．0589(2013)03．0189．04 EstablishmentofcelllinesstablyCO-expressingJapanese encephalitisvirusprM andEproteinwithamutantin prM furincleavagesite LIYe-nan，CHEN Zhen—shi，BU Zhi—gao，HUA Rong-hong‘ (StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotectmology，HarbinVeterinaryResearchInsitute， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China) Abstract：InordertoestablishtheBHK-·21celllinesstablyCO-e·xpressingprM —E·fusionproteinofJapaneseencephalitisvirus (JEV)withamutantufrinsitetodisablehtepre—peptidecleavageofprM，BHK一21cellswastransfectedwiht hterecombinant plasmidpCAG-JEV-prM (R89A)E，whichwasconstructedbyintroducingapointmutationatthecleavagesiteofprM geneby PCR nadclonedintoeukaryoticvectorpCAG—neowiht E gene．CellsstablyCO—expressingprM—E ufsionproteinwereselectedin htepresentofG418 and identified by indirectimmunofluorescence assay and western blot．In addition，the cells displaying high—leve