海洋放线菌2305菌株的形态及所产胞外多糖研究.pdfVIP

福建羹q 第三届海洋赢技术论坛 2005．08．19-23 海洋放线菌2305菌株的形态及所产胞外多糖+ 郭彩华蔡慧农杨秋明卢珍华苏文金+ (集美大学生物工程学院，厦门361021) 摘要：海洋放线菌2305菌株属于链霉菌属；液体发酵得到的的发酵液经离心除茵体，浓缩， G．100柱层析，乙醇沉淀得到两种多糖组分(简 酶和Sevage法脱蛋白，DEAE一32与Sephadex Ps2的相对分子质量45000。两者的红外光谱具有多糖特征吸收峰，PS2中硫酸基的含量为8％。 成是D一甘露糖和D一葡萄糖。 关键词：海洋放线菌，2305菌株，胞外多糖，单糖组成 stratiotes 海洋放线菌2305菌株分离于漂浮在海面上的植物水浮莲(PistiaL．)残体，属于 链霉菌属(Streptomycessp．)粉红孢类群，其产生的胞外多糖具有显着的非特异性免疫、细胞 免疫及体液免疫增强活性…。我们对该菌株进行了发酵动力学研究，发现产物多糖的生成量与 菌体的生物量呈密切正相关，属于直线回归模型。因此，该多糖的发酵动力学类型属于“生长一 产物合成偶合型”【2】。本文主要报道海洋放线菌2305菌株孢子丝和孢子的形态特征，及经液体 发酵得到的胞外多糖分离纯化与单糖组成的分析结果。 1材料与方法 1．1材料 海洋放线菌2305菌株用5L发酵罐液体发酵培养，培养基主要成分为葡萄糖、酵母膏、 G．100为Pharmacia 酵液。平板培养基和斜丽培养基均为高氏1号培养基。DEAE一32、Sephadex 产品。 1．2方法 1．2．1透射电子显微镜观察2305菌株的形态特征用划线法在平板培养基中分离出单菌落，然 后将单菌落接种于斜面培养基中，32℃培养72小时后，于透射电子显微镜观察菌体特征。。 1．2．2提取粗多糖发酵液离心将上清液与菌体分开。上清液用RE．52AA旋转蒸发器旋转蒸 发浓缩(温度55～60C，真空度0．1Pa)后，得到浓缩液。浓缩液中加入一定量的无水乙醇，使 +国家海洋“863”计划资助项目(819．05．08)；福建省教育厅资助项目(K2001100) 第一作者：郭彩华，出生于1963年，副教授，研究方向：生物工程。E．mail：hua63@sina．com 8通讯作者：苏文金，出生于1956年，教授，从事生物工程研究。E-mail： wjSU刨mu．edu．ell 378 福建羹n 第三届海洋膏技术论坛 2005．08．19-23 乙醇的终浓度为67％，搅拌，离心获得沉淀，用1／10．1／15浓缩液体积的热水溶解多糖沉淀， 离心去掉不溶物。不溶物用一半体积的热水再提取一次。合并多糖溶液，用流水透析过夜， 透析液中加入1．5倍体积的无水乙醇沉淀多糖，沉淀用50％的乙醇洗两次，真空干燥获得粗多 糖(制品口)。 粗多糖水溶液。按2％的比例加入胰蛋白酶，于37。C保温30min，得到粗多糖酶解溶液。将氯 仿、戊醇(或正丁醇)按5：1混合后，以5倍量加入到酶解溶液中，振荡，样品中的蛋白质 可与混合液形成凝胶而析出，充分静置，上层为多糖水溶液，中间层为蛋白质凝胶，底层为混 合液，用离心法除去蛋白质凝胶：重复三次，获得的水相，用1．5倍体积的无水乙醇沉淀多糖。 沉淀用50％的乙醇、无水乙醇、丙酮依次分别洗涤，真空干燥，得到多糖(制品II)。 NaCI的0．001mol／L磷酸缓冲 水溶液，取1．8mL过DEAE--32柱(1．5x26cm)，用含0．1mol／L 以苯酚一硫酸法测量多糖含量，绘制洗脱曲线。将所收集到的洗脱液分批进行透析，1．5倍体积 的无水乙醇沉淀多糖。沉淀用50％的乙醇、无水乙醇、丙酮依次分别洗涤，真空干燥，得到 多糖(制品口)。取一定质量的多糖(制品口)配成浓度约为40mg／mL的水溶液，每次取