免標記式微流體生物晶片定量化檢驗技術研讨.pdfVIP

免榇记式微流髓生物晶片定量化榆黢技衍研究 江俊霖1，施孕兢P，泻志成1，到冠踅2，李朱育2，裼正财1 l工蕖技衍研究院量测技衍骚展中心研究具 2中央大孕横械系光横鼋工程研究所 木E·mail：hcshih@itri．org．tW 摘要。生物晶片近年柬徒萤光棵就式朝向免檩芤式(1abel-free)欤展，其具有汛虢不随畴 同衰波、即畴侦测、可量化、墓敏度高等傻势。雕然在定量化的工作上，免檩记式生物晶 Plasmon 片侵於檩耙式晶片’但由於免檩记式晶片的量测技衍是基於表面鼋浆共振(Surface Resonance，SPR)光擘侦测技衍，量测光源的光强舆波畏的穗定度封侦测结果有直接影窑， 晶片上的金属屠、生物薄膜眉的裂作精单度、瑕境温度等因素亦封量测结果有不能忽视的 影窖，有相凿多的因子影窑其量化及针量工作。在本研究中，我们建立一套相位式SPR侦测 系统，探用四颗光挈侦测器，以相位正交法解析，可提高侦测裳敏度蓝可降低因光强、温 度飘移而虚生的误差。文中群述相位式侦测系统的光孥架横舆原理及寅黔结果。此外，袋 做金膜晶片，量测金镀膜厚度的裂作差冥性，监抨估金膜厚度、生物眉厚度差冥封测量值 的影窖。 网键字：免檩记式晶片，奈米，金薄膜，生物晶片 一、前言 生物晶片近年来徒蟹光檩配式朝向免檩就式(1abel-free)霰展，其具有飙唬不随畴同 衰溅、可即畴侦测、可量化、霞敏度高等侵势[1】[2]，因此在定量化的工作上，免操记式 生物晶片侵於遇去的棵记式晶片。雎然如此，要逵到真正精辈的定量甚至计量工作，仍有 相富多的工作要造行舆克服。 Plasmon 目前最受到重视的免檩就式晶片技衔；就是表面鼋浆共振(SurfaceResonance， SPR)。表面鼋浆共振的渐逝波封於液髓舆固髓介面同小於200IMI!筑圉内的表面性寅改燮非 常霞敏，可用柬桧测生物分子的键结、解雕、反虑遇程等现象。世界上已有静多廒商，例 如Biacore、BioRad、Reichert…朗襞基於SPR原理的榆测饿器，其虑用舆市埸需求舆 日俱增。 此颓型馐器在原理上不馑捣光晕技衍，遇须整合微流髓、温度控制、生物薄膜、表面 虎理、化孕分析等跨领域技衍方能提供完整功能。因羯其组成的梭鞋度，有别於傅统颓型 俄器，生化桧测俄器的量测结果受到累多不同参数的影窖，如何封其造行针量工作将是很 大的挑戟，需具有跨领域的背景知谶。 由於表面鼋浆共振系统的量测结果受到罘多燮因的影警，初步鼹纳骚现，其中光孥供 器的解析能力舆抗干攫特性、晶片裂作品黉是影警较大的误差柬源。因此，我们以正交干 553 涉衍建立SPR相位解析馐器，藉Ifl解析光相位的燮化，降低因光源稳定度、振勤、空氟温 度燮化造成的不碓定度。另外，本研究中也以敷值模凝抨估了金薄膜厚度袋作差翼封量测 结果的影譬。 =、原理舆解相位架耩 本系统揉用棱镜耦合式(Kretschman组憋[3])，以逵到鞍佳的重敏度。架耩上以雷射 鹅光源，玻璃鹚晶片基底材黉，上镀金薄膜，膜厚约捣50nm。光入射於金薄膜表面上，同 入射角度反射於另外一端的敷位描影横(CCD camera)，凿符合共振绦件畴，光强度降低， 而在影像上可觐察到黑影。探用鼋磁埸配合多眉膜理输推尊反射光强度的理输模型。 先考虑只有雨檀不同折射率介赏(介鼋傺敷分别稳晶，晶)的情况。富鼋埸平行入射 平面畴，如圊一、圊二所示。其反射保敷‰=最／屈，透射保敷舄to-，鼋埸平行於入射平 面在介面上傅播可推尊得知： ％l=—E—2=—e—,c—o—s—0—o—si—n_0-I—-—e—o—c—os—O—j—s—in_00叭 (1) ‰ EocosOlsin岛+qcosOosin岛 再考虑入射光徒介耍0到介面1，沿著Z方向傅播的波向量k加及k小舆入射光在介面之水