3 实验三 线粒体的超活染色与观察 涂.ppt

实验三　线粒体的超活染色与观察 一、实验目的 1 ．观察动植物活细胞内线粒体光学显微镜下的形态（存在）和分布； 2 ．了解细胞和细胞器的超活染色技术 二、实验原理 三、实验用品 1 ．器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸、香柏油 2 ．试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ 3 ．材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎表皮细胞。 四、实验方法 线粒体的超活染色与观察 1 ．口腔上皮细胞线粒体的超活染色 1）置载玻片于３７℃恒温水浴锅金属板上，取1/5000詹纳斯绿Ｂ1-2滴； 2）用牙签刮取口腔上皮细胞涂于染液中，染色10-15min，盖上盖玻片，以吸水纸吸去四周溢出的染液， 3）显微镜下观察．显微镜如何操作？ 4）实验结果：可见上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 2.洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的超活染色与观察 1）将载玻片置于28℃恒温水浴锅上，取1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液１-2滴，撕取洋葱鳞茎表皮，染色10-15min; 2）用吸管吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮组织展平，盖上盖玻片进行观察。 3）在高倍油镜下，可见洋葱表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至一侧贴细胞壁处．仔细观察光学显微镜下细胞质中线粒体的形态与分布？ 4）实验结果：可见在细胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体 。　 油镜的观察操作 1.转动粗调焦螺旋，把镜筒向上提升约1.5cm(有的是载物台向下降1.5cm)，使物镜与镜台保持一定距离。 2.滴1滴香柏油于玻片标本待观察的区域上，将油镜头转至工作位置，眼睛从一侧注视，转动粗调焦螺旋，直至油镜头浸没于香柏油内，几乎与载玻片相接触，但不能相碰。然后从目镜中观察，用粗调焦螺旋极其缓慢地向上调节至出现物像为止， ★注意勿将粗调焦螺旋转动方向搞反了，以免油镜头与载玻片相碰而损坏了镜头及玻片。再用细调焦螺旋调至物像清晰，此时还应适当增加光的亮度。如果镜头已提出香柏油而尚未见到物像时，应按上述过程重复操作。 3. 观察完毕后，提升物镜约1cm，把油镜转离光轴，取下玻片，先用擦镜纸擦去镜头和玻片上的香柏油，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，然后用干擦镜纸擦去镜头上残留的二甲苯。擦拭要小心，动作要轻。 五、作业 1 ．绘图示意人口腔上皮细胞和洋葱细胞内线粒体的形态结构。 2.简述使用油镜前后的注意事项。 下次实验植物组织培养 Ⅰ：培养基配制及其灭菌 * * 　　一、实验目的 　　二、实验原理 　　三、实验用品 　　四、实验方法 五、作业 　　六、下次实验 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 线粒体是细胞进行?的场所，其形态和数量随物种、组织器官和生理状态的不同而发生变化。 詹纳斯绿Ｂ可对线粒体进行活染,这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态),呈蓝绿色，而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色态，从而可观察细胞内线粒体颗粒的存在。