超声辅助提取对茯苓多糖免疫活性的影响.pdfVIP

食用菌学报@2012．19(4)：79～82 文章编号：1005—9873(2012)04—0079—04 超声辅助提取对茯苓多糖免疫活性的影响 姜碉，潘利华，罗建平。 (合肥工业大学生物与食品工程学院，安徽合肥230009) 摘要：比较了60℃下超声辅助提取与热水提取茯苓(Por缸cDc∞)多糖的得率，并考察了水提茯苓多糖 (wPP)和超声辅助提取茯苓多糖(UPP)对小鼠腹腔巨噬细胞增殖、TNF．d分泌、No产生的影响。与水提法相 比，超声辅助提取显著提高茯苓多糖的得率，提取时间为80min时，超声辅助提取法的得率是水提法的 2．8倍。wPP和uPP在25～400”g／mL浓度范围内均对小鼠腹腔巨噬细胞无毒性，在刺激小鼠腹腔巨噬细 胞产生No方面，两者无显著差异。在25、50和100弘g／mL时，uPP和wPP对巨噬细胞的增殖无差异， 200 巨噬细胞分泌TNF．a方面的作用效果显著优于wPP。 关键词：多糖；茯苓；超声辅助提取法；免疫活性；巨噬细胞 茯苓(PD，妇coc∞)隶属于非褶菌目(皖)2011．002。 1．3主要试剂和仪器 (Aphyllophorales)，多孑L菌科(Polyporaceae)‘1|， 是一种常用的食药用真菌，茯苓多糖作为其主要 胎牛血清购自杭州四季青生物有限公司； 活性成分，具有抗肿瘤、抗病毒和增强免疫力等 多种生物活性[24]。茯苓多糖的传统提取方法为司；MTT购自Sigma公司；TNF—a试剂盒购自 水提法，该方法存在耗时长、提取率低等缺点。 R如公司；No试剂盒(酶法)购自南京建成生物 目前采用的辅助提取法主要有碱提法、超声辅助 工程研究所；其余试剂均为分析纯。 提取法、微波提取法和CO。超临界流体萃取 SY一1000E多用途恒温超声提取机(北京弘 法[5‘7]，其中，超声辅助提取法具提取时间短、效 祥隆生物技术开发有限公司)；V．1100型可见分 率高、提取温度低等优势[8’9]而受到广泛关注。 光光度计(上海美谱达仪器有限公司)；MCo． 在多糖的超声辅助提取工艺优化和生产实践中， 17AIC型二氧化碳细胞培养箱(SANYo公司)； Model 多以得率为评价指标，很少考虑多糖的生物活 680型酶标仪(Bio．Rad公司)。 性。目前还未见关于超声提取对茯苓多糖生物 1．4茯苓多糖的提取 活性影响的报道。因此，笔者研究了超声辅助提 茯苓菌核粉碎后将粉末置于索氏提取器中， 取对茯苓多糖免疫活性的影响，以期为超声辅助 采用石油醚以料液比15：100(w／v)在60℃下 提取茯苓多糖的生产应用提供参考。 回流8h进行脱色脱脂处理，残渣置于空气中自 然晾干后以料液比1：25(w／v)用水提法和超声 1材料与方法 辅助(500w)提取法于60℃分别提取20、40、 1．1材料 60、80、100 min，残渣重复提取一次，合并两次滤 茯苓(PD—ncocDs)购于北京同仁堂合肥一 液，减压浓缩后加乙醇至醇浓度为80％，过夜后 店(毫州京皖中药饮片厂提供)。 收集沉淀，sevag法m3脱蛋白，透析(3500Da截 1．2实验动物 留分子量)，冷冻干燥后分别得水提茯苓多糖 KM雄性小鼠：SPF级，体重(20±2)g购于wPP和超声辅助提取茯苓多糖UPP，采用苯酚． 安徽医科大学实验动物中心。合格证号：SCxK硫酸法[1u测定多糖含量，计算多糖得率。