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性染色质检测技术 X小体检测技术 Y小体检测技术 X小体检测技术 X小体：在间期细胞核中，由于女性的两条X 染色体中的一条基本处于失活状态而形成一 种特殊的深染的块状结构，称为X小体。 X小体与X染色体的关系 用人体的体细胞，如口腔上皮细胞或女性个体的阴道上皮细胞，通过特异的处理和染色，在显微镜下可发现部分细胞核膜的内缘有一块染色较深、大小为1μm左右的呈半月形的小块，即X小体。有些细胞中，X小体的位置不在核膜的内缘，那就不容易与其他的染色质块区别了，所以一般只用紧贴于核膜内缘的作为阳性。 根据有关实验查明一个分裂间期细胞核中仅 有一条X染色体呈松散状态，参加细胞生理活 动，另一条X染色体则仍保持异固缩的状态， 所以染色较深而成为X小体。据此，正常男性 个体不可能出现X小体；正常女性可能出现一 个X小体。其X小体与X染色体的关系如下 表，即X小体数目等于X染色体数目减1。 性染色体的类型 性别 X小体的数目 X Y X O X X X X Y X X X X X X X 男 女 女 男 女 女 0 0 1 1 2 3 口腔粘膜细胞X小体检测法 1、漱口3次，然后以木质压舌板刮取口腔颊部粘膜细胞，放入盛有生理盐水的离心管中，摇动分散细胞。 2、用1 000转/分 离心10分钟，除去上清液，细胞沉淀物用3∶1的甲醇冰醋酸固定剂固定10分钟。 3、再用1000转/分离心10分钟，除去上清夜，向细胞沉淀物中加入几滴新的3:1的甲醇冰醋酸固定剂制成细胞悬液。 4、将细胞悬液滴入载玻片上，让其在空气中干燥后，放入5N HCl中处理10分钟，自来水中漂洗数秒钟，放入0.2%甲苯胺蓝染色液中染色1~1.5分钟或放入硫堇染色液中染色30分钟，自来水漂洗，空气中干燥后，在油镜下依次观察细胞核着色均质，核摸完整的细胞100个，并计数具靠近核膜边缘的半月形X 小体的细胞数 羊水细胞X小体检测法 从中期妊娠（16周左右）的孕妇中，经羊膜穿刺抽取羊水5~10ml左右，放入离心管中，以1000转/分 离心10分钟，去上清液，加入3:1甲醇冰醋酸固定剂5~10ml,固定30分钟以后；再以1000转/分离心10分钟，去上清液，再加入新鲜的固定剂3~5滴制成细胞悬液；然后按口腔粘膜细胞X小体检测法制片，染色和读片。 若抽取的羊水呈乳白色，则表明羊水中含胎 脂过多。如不经处理，对观察有极大的妨 碍。为此，可先用1:1乙醚酒精处理20分钟， 然后用95%酒精固定30分钟后，按口腔粘膜 细胞制片法制片和读片。 绒毛膜细胞X小体检测法 取材方法与绒毛培养法相同。将绒毛枝 取出放在玻片上，置显微镜下观察，确认为 绒毛枝，则行两片对合压片4~6张，立即放入 95%酒精中固定15~20分钟，取出晾干，用 0.2%甲苯胺蓝染色1分钟。然后，按口腔粘 膜细胞法进行漂洗，干燥和镜检。 X小体 Y小体检测技术 Y小体：男性Y染色体长臂上的DNA重复序 列具有强烈的荧光着色性，称为Y小体。正 常男性体细胞中只有一个,正常女性没有。 Y小体和Y染色体的关系 1970年Caspersson等发表了人类第一张中期染色体荧光带型照片，发现Y染色体长臂经荧光染料染色后具有特异的辉煌的荧光。随后，不同的研究者用同类的荧光染料对男性的各种间期细胞核，以及精子的头部进行染色，均可观察到一个类似于Y染色体长臂的直径约0.3μm的圆形或椭圆形的荧光辉煌的亮点。而在女性中则没有。 从而确认Y小体是Y染色体长臂上的一部分。 人类 Y小体与Y染色体的关系如下表： 性染色体的类型 性 别 Y小体的数目 XX 女 0 XY 男 1 XXY 男 1 XXXY 男 1 XYY 男 2 羊水细胞Y小体检测法 按检查X小体的方法获得羊水细胞，进行固 定，制片。用0.5%的阿的平染色液染色15分 钟以上，然后用pH5.6的Mcllvaine磷酸缓冲 液洗去剩余的染色液，再滴上新的缓冲液1~2 滴并加上盖玻片，立即置荧光显微镜下用油 镜进行检查。 血细胞Y小体检测法 取外周血2~3滴，置于玻片中央，用玻棒涂敷 成直径约1cm的圆形厚血片。待干后加上数 滴3%的冰醋酸固定15分钟左右，待红细胞全 部溶解后，用pH5.6的Mcllvaime缓冲液彻底 冲洗，空气干燥。 再滴加0.5%阿的平水溶液染色15分钟，用缓