暨南大学徐明芳-第三章细胞的破碎和分离_20....ppt

Chapter 3 Cell Disruption 第三章 细胞破碎;第三章 细胞的破碎和分离 ;思考题; ※ 3.1? Cell Membranes 细胞膜;生物分离的第一步是将生物机体从发酵液中分离，通常使用过滤和离心等方法，这在第二、三章中已有陈述。 大多数情况下，抗生素，胞外酶，一些多糖，及氨基酸等目标产物存在于在发酵液中。在上述过程中，需被分离的发酵液可被看作一种副产物来处理，以此分离和纯化产物。 ;有些目标产物不在发酵液中，而是存在于生物体中。尤其是由基因工程菌产生的大多数蛋白质不会被分泌到发酵液中，而是在细胞内沉积。 脂类物质和一些抗生素也是包含在生物体中。还有一些目标产物就是细胞本身，如面包酵母。 还有，产物如类固醇不必通过细胞破碎提取。大多数情况下，产物还是包裹在生物体内，属胞内产物。;3.1节回顾一下细胞壁的结构。从中可知，在大规模生产中，细胞破碎方法是十分有用的。 我们很容易将这些方法划分为两大类，化学法和机械法。 化学法我们将在后面作详细介绍，有渗透冲击法、表面活性剂增溶法或有机溶剂溶解法。这些化学法较温和，细胞破坏后产物也不会不可逆的变性，规模也容易放大：如果需要处理10倍量的生物有机体，只需要加入10倍的化学药品剂量。;方法;方法;机械法主要有匀浆法和研磨法;细胞膜结构; 革兰氏阴性细胞结构如图所示。有三层：最外层约8mm厚，酶大多数镶嵌在这层膜上。 革兰氏阳性原核生物缺少最外层结构，但有第二层肽聚糖层和胞浆空间。 革兰氏阳性菌细胞壁较厚，约20～80nm。含15～50层肽聚糖片层，每层厚度1nm，约占细胞干重的50%～80%。此外，尚有壁磷壁酸和膜磷壁酸。 ; 革兰氏阴性菌细胞壁细胞壁较薄，有1～2层肽聚糖片，在肽聚糖层外尚有脂蛋白、脂质双层、脂多糖三部分。脂蛋白的功能是将外膜固定于肽聚糖层，脂类和蛋白质等在稳定细胞结构上非常重要，如果被抽提，细胞壁将变得很不牢固。 ;细胞壁组成 ;藻类细胞壁的结构与组成 ;3.2 细胞破碎理论 ;3.2 细胞破碎理论;3.2 细胞破碎理论;细胞壁的破碎 ;3.3 细胞破碎技术 –珠磨法;WSK卧式高效全能珠磨机;ZM系列卧式密闭珠(砂)磨机; 图2-5 Netzsch Molinex KE5搅拌磨 图2-6 Netzsh LM20砂磨机 ;3.3 细胞破碎技术 ;3.3 细胞破碎技术;3.3 细胞破碎技术;3.3 细胞破碎技术;g. 微生物特性;3.3 细胞破碎技术—匀浆法;JJ-2组织捣碎匀浆机 ;高压匀浆法是液体剪切破碎方法中的一种。它的主要设备是高压匀浆机，它有一个高压位移泵和一个可调节进料速度的针形阀（见图）。当菌体悬浮液经过高压泵加压后，通过阀芯与阀座之间的通道时，悬浮液突然改变方向，向球撞击。在通过阀门时产生高剪应力，向环撞击时产生巨大的冲击力，将细胞破碎，然后排出;3.3 细胞破碎技术;3.3 细胞破碎技术;3.3 细胞破碎技术—撞击破碎法;3.3 细胞破碎技术--超声破碎法;2. Ultrasonication 超声波;3.3 细胞破碎技术--超声破碎法;3.3 细胞破碎技术—化学破碎法;3.4 物理法和化学法的比较 ;3.5 破碎方法的选择;3.6 细胞破碎的评价--直接计数法;3.6 细胞破碎的评价--间接计数法;3.7 基因工程表达产物;3.7 基因工程表达产物;3.7 基因工程表达产物---人?-干扰素的后处理;3.7 基因工程表达产物;3.8 包涵体简介;3.8 包涵体—形成原因;3.8 包涵体--分离及洗涤;3.8 包涵体--变性溶解;3.8 包涵体--变性溶解;包涵体--蛋白质的复性;