核酸代谢4--蛋白质合成.pptVIP

8.4.6 蛋白质的合成过程 氨基酸的活化 肽链合成的起始 肽链的延伸 肽链合成的终止与释放 8.4.6.1氨基酸的活化---合成氨酰- tRNA 氨基酸的活化是指各种参加蛋白质合成的AA与携带它的相应的tRNA结合成氨酰- tRNA合成氨酰- tRNA的过程。活化反应在氨酰-tRNA 合成酶的催化下进行。 氨基酸在掺入肽链前，必须活化，获得足够的能量。 氨基酸活化的总反应式是： 氨基酸+ATP+tRNA +H2O 氨酰-tRNA+AMP+PPi 书写如：Ile- tRNAIle——异亮氨酰-tRNAIle 每一种AA都有各自特异的氨酰-tRNA合成酶。氨酰-tRNA合成酶具有高度的专一性，它既能识别相应的氨基酸（L-构型），又能识别与此氨基酸相对应的一个或同工tRNA 分子；即使AA识别出现错误，此酶具有水解功能，可以将其水解掉。 酶高度的专一性保证了蛋白质的合成具有一定的保真性。 氨酰-tRNA合成酶 tRNA与多肽合成的有关位点 可以说tRNA是一个万能接头： （1）对氨酰- tRNA合成酶的识别位点（接头合成酶） （2）3端-CCA上的氨基酸运载位点（接头氨基酸，装载） （3）对核糖体的识别位点（将氨基酸运送到目的地） （4）反密码子位点（接头mRNA，验货并卸载） 氨酰- tRNA合成酶 氨酰基-tRNA的合成 图 氨酰-tRNA 氨基酸一旦与tRNA形成氨酰-tRNA后，氨基酸的去向就完全由tRNA决定。 8.4.6.2原核生物蛋白质肽链的合成 1.? 起始 A.起始AA 大肠杆菌中, 起始密码子AUG 所编码的氨基酸并不是甲硫氨酸本身, 而是甲酰甲硫氨酸（fMet-tRNAf）。 原核细胞中有两种携带Met的tRNA：tRNAf和tRNAm 真核生物：Met-tRNAMet。真核生物无甲酰化过程，起始氨基酸是Met, 只有一种携带Met的tRNA，即Met-tRNAMet 。 Met-tRNAf + N10-甲酰FH4 fMet-tRNAf + FH4 甲酰化酶 B. 70S起始复合物的形成 30S复合物的形成:核糖体30S小亚基在IF3帮助下，识别、结合mRNA上的SD序列。在IF1和IF2的参与下，30S-mRNA-IF3进一步与fMet-tRNAf、GTP结合，并释放IF3，形成30S复合物：30S-mRNA- fMet-tRNAf 30S复合物与50S核糖体结合形成70S复合物，并释放GDP、IF1和IF2。 原核起始复合物 起始密码子 30S亚基 IF3 IF2-GTP IF2-GTP IF3 IF3 IF2 1、mRNA就位 2、起始tRNA结合 3、大亚基结合 2.肽链的延伸 分为三步： 1)新氨酰-tRNA入位 新的氨酰- tRNA进入A位。需要消耗GTP，并需EF-Tu,EF-Ts两种延伸因子。 延伸因子EF-Tu结合GTP后，协助氨酰-tRNA的就位。 氨酰-tRNA入位后，EF-Tu-GDP从核糖体上释放下来，在第二个延伸因子EF-Ts帮助下EF-Tu-GDP释放掉GDP并重新结合一分子GTP再生成EF-Tu-GTP，进入下一轮循环。 所有氨酰-tRNA必须与EF-Tu-GTP 结合才可进入核糖体A位，除了 fMet-tRNAf 1. 入位 2)转肽 在肽酰转移酶的作用下，A位点新氨酰-tRNA氨基亲核攻击P位点上fMet-tRNAf的酯键羰基，形成肽键，无负荷的tRNA留在P位，此时A位点携带一个二肽。 2.转肽 3)移位 在EF-G（移位酶）的作用下，核糖体沿mRNA5’? 3’方向移动一个密码子的距离，结果使原来在A上的肽酰-tRNA移到了P位点，原来在P位点的无负载的tRNA离开核糖体，同时一个新的密码子进入空的A位， EF-G 催化的移位过程需水解GTP提供能量。 3.移位 以上三步为一个延伸循环，肽链每掺入一个氨基酸就重复一次延伸循环。 肽链合成从N-C 方向（mRNA、肽链）： mRNA从5’端向3’，多肽从N端向C端。 速度：E.coli.每秒约15个氨基酸。 3.肽链合成的终止与释放 当终止密码子出现在A位时，RF结合在A位，肽链合成终止。 RF的结合使肽酰转移酶活性变为酯解酶活性，使肽基释放，无负荷的tRNA随机从核糖体脱落，该核糖体立即离开 mRNA，在RF3下,消耗GTP而解离为30S和50S。 蛋白质的合成是一个高耗能过程： 第一个肽键形成（合成一个二肽） 高能键 甲酰-甲硫氨酰-tRNA