第5章环境免疫分析.pptx

1.什么是免疫 2.什么是免疫分析 3.免疫分析在环境分析中的应用 4.环境污染物免疫分析的原理 5.免疫分析用于环境分析和监测的优点 6.其它基于抗体的分析方法 ;1.什么是免疫;人类免疫缺陷病毒(HIV)的结构;抗原和抗体;抗体的产生：初次免疫应答和再次免疫应答;免疫应答;抗体的结构;抗体的结构;抗原与抗体作用;抗体的种类;;;杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体 ;制备单克隆抗体的步骤;2.什么是免疫分析;;环境污染物的免疫分析;Pesticides Alachlor Aldicarb Atrazine Benomyl Captan Carbendazim Carbofuran Chlorpyrifos methyl DDT Imazaquin Ivermectin Lindane Metalaxyl Metolachlor Paraquat Procymidone Triazines Trifluralin 2,4-D ;Inorganics Cadmium Indium Lead Mercury Organics Benzene/toluene/ethyl benzene/xylene compounds Diesel Fuel Gasoline Polyaromatic hydrocarbons Pentachlorophenol Polychlorinated biphenyls Trinitrotoluene Other compounds Antibiotics Hormones Mycotoxins Vitamins ; 美国环保局颁布的免疫分析标准方法 (US EPA methods) ;Method Number ;Method Number ;4.环境污染物免疫分析的原理; 应尽量直接选择购买结构和性质合适的化合物作为半抗原。如果没有合适的化合物，就要首先对待测物进行衍生化反应，合成半抗原。 所合成的半抗原一方面要含有能够与蛋白质连接的活泼官能团，另一方面要尽可能保持原化合物的化学结构、电荷分布、空间结构等物理化学性质，特别是应保持它原有的特征表位结构。 半抗原分子应通过一个长度为3-6个原子的连接臂与蛋白质分子连接，以避免半抗原受到蛋白质的空间屏蔽，不能有效地被动物的免疫系统识别。 出现杂原子或特殊官能团，并且与半抗原的连接位点应尽量远离半抗原的特征表位结构，以避免原化合物的物理化学性质发生改变。;半抗原与蛋白质的偶联:碳二亚胺法和活性酯法;环境污染物免疫分析原理 直接竞争(direct competitive)ELISA COI:compounds of interest E:enzyme;Multiskan EX 酶标仪;Wellwash AC 洗板机;Microtiter Microplates 酶标板;竞争ELISA的S形剂量-反应曲线 y=(a-d)/[1+(x/c)b]+d;其中y是吸光度，x是待测物浓度，a，b，c和d为正数。 当x=0时，y=?；当x→+∞时，y→?；当x=c时，y=? 当x=0时，y=a，所以a表示空白溶液所对应的吸光度； 当x→+∞时，y→d，所以d表示溶液浓度趋近于无穷大时，溶液的吸光度，即溶液的背景值； 当x=c时，y=(a+d)/2，所以c表示50%的抗体被竞争结合时所对应的溶液浓度，记为IC50。 a和d是两条渐进线，b为斜率，c为IC50。 为了使不同的ELISA方法的结果之间可以比较，常常将吸光度进行归一化，即将样品吸光度与空白溶液吸光度的比值记为B/B0(%)，代替吸光度值y。 %CR=100×IC50(待测物)/IC50(交叉反应物) 检测的专一性可以用交叉反应率表示，即分析物与其结构类似物的IC50的比值。;;第一抗体和第二抗体;直接和间接免疫分析;直接、间接、竞争和夹心ELISA;半抗原设计 ;;PBA、PBA-BSA和BSA的紫外光吸收光谱图 其中曲线1、2和3分别为PBA、PBA-BSA和BSA的紫外光吸收波长扫描曲线。 ;PBA-BSA和PBA-OVA的MALDI-TOF-MS谱图;全抗原表征 半抗原-载体蛋白结合比的计算 ;;5.免疫分析用于环境分析和监测的优点;(1)灵敏：免疫分析对水样中污染物的最低检出浓度可以达到μg/L，对土壤中污染物的最低检出浓度可以达到mg/kg，可以满足环境分析和监测的要求。由于灵敏度较高，不需要对大量样品进行预富集，因此所需的样品量也较少。 (2)快速：由于免疫分析的灵敏度较高，所以分析水样一般不需要富集、分离、净化等复杂的前处理步骤，对于土壤或其它种类的样品也只需要少量简单的前处理步骤，大大节省了分析时间。大多数免疫分析过程本身所需时间也比较