基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法与PCR产物测序法检测乙型肝炎病毒耐药变异的比较.pdfVIP

·436· J 中华肝脏病杂志2011年6月第19卷第6期ChinHepatol，June201l，V01．19，No．6 ·病毒性肝炎· 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法 与PCR产物测序法检测乙型肝炎病毒 耐药变异的比较 刘菲 肖婷汪玲谢建萍 李国宏 梁歹了玲 罗春慧 【摘要】 目的比较基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(MALDI—TOFMS)和PCR产物 直接测序法检测HBV耐药基因位点的敏感性。方法共收集100例慢性乙型肝炎(CHB)患者血清， DNA500拷贝／ml， 其中90例服用拉米夫定(LAM)等核苷(酸)类似物治疗1年以上、HBV DNA1X 10例肝功能正常、HBV 105拷贝／ml，未进行抗病毒治疗。对所有血清均采用MALDI— TOF MS法及PCR产物直接测序法(简称直接测序法)检测HBVP基因已知9个变异位点的变异情 况，通过软件分析得出变异位点序列。根据样本量用相应的Pearsonx2检验与Yatesx2检验。结 果在服用LAM等核苷(酸)类似物的90份患者血清中，MALDI-TOFMS法测得53份阳性，检 出率58．89％，共发现86个变异位点；PCR直接测序法仅检测到19份阳性，检出率21．11％，仅 发现28个变异位点，两者间检出率差异有统计学意义(P0．05)。10例从未接受过口服抗病毒 药物治疗的患者血清用两种检测方法均没有检测出变异位点。检测90例接受核苷(酸)类似物治疗 的患者血清，HBVDNA水平在500～1000拷贝／ml、103～104拷贝／ml、104～10，拷贝／ml时，质 谱法阳性检出率分别为50．00％、52．08％和77．27％，而PCR直接测序法分别为0、8．33％和45．45％。 在相同中、低滴度HBVDNA载量下，质谱法阳性检出率均高于测序法，两者差异有统计学 意义(P0．05)。结论MALDI—TOFMS法检测已知耐药位点的敏感陛高于PCR直接测序法。 【关键词】 肝炎病毒，乙型， 变异， 光谱法，质量，基质辅助激光解析电离， 聚合酶链反 应l测序 ofHBV-PmutationdetectionMALDI-TOFMsanddirectPCR UU Comparisonstudy by sequencing Fei，XIAO Ting,WANGLing，XIEJian-ping,LIGuo-hong,HANGQiao-ling,LUOChun-hui．Department South 410008,China ofInfectiousD妇easeXiangyaHospital,CentralUniversity,Changsha author：XIE CorrespondingJian-ping,Email：xiefianpin9999@yahoo．corn．cn To thesensitivitiesofMALDI—TOFMSanddirectPCR [Abstract]Objectivecompare sequencing Bvirus．Methods fromchronic B on mutationsdetectionof 100serum gene hepatitis samples hepatitis were consistedof90serum 90chronic B patientscollected，which samples(studygroup)fromhepatitis for 1