利用三倍体诱导太平洋牡蛎MI和MII四倍体研究.pdfVIP

禳建蠹仃 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19．23 利用三倍体诱导太平洋牡蛎MI和MII四倍体+ 王昭萍+李慷均 于瑞海姜波 (中国海洋大学水产学院，青岛266003) 四倍体。D型幼虫期的流式细胞仪检测结果表明，利用CB抑制PBl释放诱导的MI四倍体幼 6．DMAP处理组(幼虫四倍体率为50．45％一68．87％，平均58．71％)。 抑制三倍体受精卵Pb2释放获得的MII四倍体群幼虫在孵化后1周内死亡率极高，存活 率仅为13．4％。抑制三倍体受精卵PBl释放获得的MI四倍体群幼虫在在孵化后的10天内存 活率均明显高于MII四倍体。培育22天后幼虫出现眼点，平均成活率分别为3．40％和2．1％。 关键词：太平洋牡蛎Crassostrea gigas；MI四倍体；MII四倍体；三倍体 太平洋牡蛎(Crassostreagigas)二三倍体由J：其育性筹…，生长快【2】等优点，深受养殖业者 和消费者的喜爱。然而人丁直接诱导三倍体极易受到外界因子(如温度、密度)的影响，无 法确保三倍体率达到100％，诱导处理带来的胁迫也大大降低了幼虫的成活率和产量，而且诱 导剂的安全性还有待于进一步的验证。另外，三倍体不能自我延续种群，需要每年进行诱导， 操作繁琐，技术要求高，推广难度大。而四倍体牡蛎的培育可解决以上问题，因为四倍体和 正常的_倍体杂交可以产生100％的三倍体【31，爿：且四倍体贝类具有较高的繁育能力【4j，可建 立稳定的群系。 目前，四倍体牡蛎的获得土要有2种途径：一是利用_倍体直接诱导四倍体，一是利用 二倍体真接诱导四倍体。已尝试过抑制第1极体或同时抑制2个极体的释放瞄’6J、抑制第1次 卵裂【71、细胞融合‘71和人工雌核发育‘81等从二倍体直接诱导四倍体的方法，均获得了叫倍体的 胚胎或幼虫，但却没有得到具存活能力的四倍体。在其它贝类也有很多用_倍体赢接诱导四 倍体的研究，尽管在胚胎初期都检查到一定比例的四倍体，但具存活能力的四倍体则少有报 道，仪通过抑制极体释放这一途径在地中海贻贝‘91、栉孔扇贝‘101和菲律宾蛤仔‘61中得到了少 数存活的四倍体个体。1994年，Guo和Allen利用二三倍体的卵与正常精予受精后，以CB抑制 处理第一极体的释放，在太平洋牡蛎中首次获得了存活的MI四倍体[11J。此后，利用这种方法 又在合浦珠母贝【12】和美洲牡蛎中培育出存活的MI四倍体。 4+863高技术项日资助(2004AA623820) 4通讯作者。Email：zpwang@ouc．edu．cn 57 谥建霞亿 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19—23 本文利用太平洋牡蛎三倍体的卵与正常二倍体的精予授精，通过CB、6-DMAP两种诱导 剂对其受精卵进行处理，抑制其第一极体或第二极体的释放来诱导产生-P_q倍体，以期培育出 存活的四倍体牡蛎，为全三倍体牡蛎的产业化生产奠定基础。 1材料与方法 1．1材料 实验用太平洋牡蛎取自山东威海市承天集团养殖海区，其中三倍体为．_二龄贝，是通过四倍 体与_倍体杂交的方法培育而成，所用个体均通过流式细胞仪检测倍性；=倍体也为二龄贝， 壳长10cm以上。 产品。 2．1方法 2．1．1精卵的获取 通过解剖法获取精卵。亲贝剖去右壳后，取少景性腺物质在显微镜下鉴别雌雄，并观察 精卵的质量。选取发育成熟的三倍体雌体和-倍体雄体，将每个雌体的卵子单独剥离于 1000ML的烧杯中，先用200目筛绢过滤去除大的组织碎片，再用500目筛绢过滤清洗卵子后， 置J：24℃新鲜过滤海水中约1h，等待受精。 选取2．3个成熟较好的雄体，剥离取精，精液用500目筛绢滤除大的组织碎片即可。 1．2．2授精 采用人T方法受精。受精前先要统训‘各烧杯中的卵子数量，并检查卵子是否被精子污染， 若发现卵子出现极体或分裂等受精现象则弃之不用。根据卵量的多少，向每个烧杯中加入适 量精液，并迅速搅拌均匀。若加入精子过多，则在受精后5—10min洗卵去除多余精子。 I．2．3诱导处理 受精后，在显微镜下连