利用转基因胡萝卜表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1研究.pdfVIP

利用转基因胡萝 卜表达口蹄疫病毒结构蛋白VP1 摘 要 口蹄疫 (foot-and-mouthdisease，FMD)是偶蹄动物一种急性、发热性、高度接 触性传染病，目前尚无一种十分有效的方法进行防治。利用转基因植物生产可以直接口 服的疫苗来防治该病具有十分广阔的前景。胡萝 卜种植广泛，易于组织培养和转化，可 以生食，对人类特别是婴幼儿较为理想，是生产口服疫苗理想的 “生物反应器”。本实 验以胡萝 卜为转化受体，研究了口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV) 结构蛋白VP1基因在转基因胡萝 卜中的表达情况，为进一步研究利用转基因植物生产口 服疫苗和研制防御口蹄疫的新型疫苗提供了一条新途径。 本实验选用三个胡萝 卜(DaucuscarotaL.var.sati间栽培品种金笋五寸、Carol 和改良黑田七寸，以它们的下胚轴和子叶为外植体，首先建立了高效的再生体系。 在此基础上，以Carol的下胚轴和愈伤组织为受体材料，利用根癌农杆菌LBA4404 介导，转化质粒pBI121，实现了外源报告基因GUS在胡萝 卜中的瞬间表达和稳定表达。 在成功地构建了携带有FMDV结构蛋白VP1基因的植物表达载体pBFMDV后，利用根 癌农杆菌LBA4404介导，将FMDVVP1基因导入胡萝 卜细胞中，经PCR和PCR-Southern 杂交等方法的鉴定，确认FMDVUPI基因已整合到胡萝 卜染色体中。SDS实验结果 初步证明了在转化苗中有目的基因的表达。Western-blotting结果进一步确认了目的基 因在转化苗中的表达。Dot-ELISA和ELISA实验证明在转化苗中表达的目的抗原可以和 抗口蹄疫病毒的抗体特异性地结合。以上实验结果证明口蹄疫病毒结构蛋白VP1在转基 因胡萝 卜中表达成功，而且表达的目的蛋白具有活性。 本实验是第一个以胡萝 卜为受体材料生产口蹄疫疫苗的研究，以上的实验结果为转 基因植物生产口蹄疫疫苗提供了新的思路和发展前景。 关键词:转基因胡萝 卜组织培养 遗传转化 GUS基因 口蹄疫病毒(FMDV)结构 蛋白UP1基因 口服疫苗 ression ofFoot-and-MouthDiseaseVirusStructuralProtein TheExp VP1inTransgenicCarrots Abstract Foot-and-mouthdiseaseisakindofinfectiousdiseaseofartiodacytls,whichisacute, pyreticandhigh-tangent.Therehasbeennoeffectivemethodbyfartocurethisdisease.Oral vaccinesproducedbytransgenicplantsarebelievedpromisinginthepreventionofthis disease.Thecarrotisapttotissuecultureandtransformation.Atthesametime,itgrows widelyandcaneatdirectly.Furthermore,itisperfecttomenspeciallytobabies.Soitisa perfectbio-reactorinproducingoralvaccines.Inthiswork,Carrotwaschoseasthe transformationadaptor.FMDVstructuralproteinVPlgenewasinvestigated,whichwas expressedintransgeniccarrot.Allofaboveprovidedanewapproachofinvestigatingthe new-sytlevaccinetodefendandcurethefoot-and-mouthdisease Intheexperiment,wefirstlyestablishedaeffectiveregenerationsystemofcarrotby usinghypocoytlsandcoytledonsasexplantsrfom3carrot(Daucu