利用组织培养技术筛选辣椒抗枯萎病变异体的研讨.pdfVIP

蔬 菜 利用组织培养技术筛选辣椒抗枯萎病变异体的研究 黄炜巩振辉齐飞 (西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌712100) 摘要用“农城椒2号”、“0127”的子叶作为外植体诱导产生愈伤组织，以辣椒枯萎病粗毒索 作为选择剂，筛选辣椒抗枯萎病细胞变异无性系。结果表明，不同辣椒品种(系)愈伤组织对毒寨有 不同的忍耐力。辣椒枯萎病病原菌粗毒素对辣椒子叶愈伤组织诱导、生长增殖及不定芽的分化、生 长具有显著的抑制作用，随着粗毒素浓度的增加，抑制作用增强。在40％的枯萎菌粗毒素浓度下筛 选辣椒抗枯萎病体细胞变异无性系，抗性细胞系稳定性研究表明，获得了一批抗辣椒枯萎病的体细 胞变异无性系，并成功再生抗性植株。 关键词辣椒，枯萎病}体细胞变异无性系f抗性筛选}植株再生 annuum 辣椒枯萎病(FusariumLeon)是辣椒的主要真菌性病害之一，在全国各地均有不 同程度发生，一般发病率10％～25％，发病重的田块高达70％～80％，造成严重的经济损失。 目前防治辣椒枯萎病主要依靠化学药物，易造成环境污染，危害人类健康。发掘和创制新的抗 源，选育抗病品种已成为有效控制辣椒枯萎病的重要途径。自从1973年Carlson[11筛选出第一 株植物细胞抗病突变体—烟草抗野火病突变体以来，植物离体培养筛选细胞突变体技术迅速 发展，为植物遗传改良开辟了一条新的途径。 目前国内外已在一些植物上建立了较为完善的利用组织培养技术离体筛选抗逆种质的新 方法，在抗病、抗除草剂、耐盐胁迫、抗金属离子和改良品质育种方面都取得了可喜的成就，获 得了大量的突变体材料∞]。然而，关于诱导、筛选辣椒抗枯萎病体细胞变异无性系在国内外尚 未见报道。为此，本项研究拟在建立和完善辣椒抗枯萎病体细胞变异无性系诱导筛选体系的基 础上，获得抗枯萎病的体细胞变异株系，这对于加速辣椒抗枯萎病新品种的选育与推广，发展 可持续农业无疑具有重要的理论和实践意义。 1材料与方法 1．I材料 以“农城椒2号”、“0127”2个辣椒品种(系)作为供试材料。其中前者由西北农林科技大学 农城种业中心提供；后者由西北农林科技大学园艺学院辣椒种质资源与育种课题组提供。 f．sp．vasinfectumSnyd． 辣椒枯萎病原菌为尖孢镰刀菌萎蔫专化型(FusaHumowysporum Et Hans．)，由山西农业大学园艺系孙胜、赵英同志惠赠。 BA+0．5 mg／L 辣椒愈伤组织诱导分化培养基设T6(MS+3％蔗糖+o．6％琼脂+5．0 IAA)和T8(MS+ BA+O．75mg／L IAA)、T7(MS+3％蔗糖+o．6％琼脂+5．Omg／L mg／L IAA)3种。 BA+1．0mg／L 3％蔗糖+o．6％琼脂+5．0mg／L 1．2方法 1．2．1辣椒无菌苗的获得 精选后的供试辣椒种子经55。C温水浸种2h，70％酒精浸泡40s，2％次氯酸钠溶液消毒 30 照2000lx(14 h／d)，白天温度26C，晚上20C条件下发芽并培育成苗。 园艺学进展(第六辑) 1．2．2辣椒枯萎病原茵粗毒素的制备 辣椒枯萎病原菌在进行液体培养前7d接种至PDA固体培养基上进行繁殖和鉴定m。然 000 后挑取6块直径8mm的单菌落接种于1 mL查彼克培养液中，置274C黑暗条件下110～ 120 000 r／re．in振荡培养14d。用双层灭菌滤纸滤去