苦参碱影响肺纤维化大鼠病理及氧化应激水平.docVIP

精品论文 参考文献 苦参碱影响肺纤维化大鼠病理及氧化应激水平 陈哲张秀峰 （南华大学附二医院 湖南 衡阳 42100） 本课题由湖南省卫生厅科研计划项目（编号：B2009058）资助 【摘要】目的：研究苦参碱对博来霉素诱导的肺纤维大鼠病理变化及氧化应激的影响，探讨苦参碱在肺纤维化治疗中的作用及可能机制。方法：120只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组（A组）、博来霉素组（B组）、泼尼松组（C组）、苦参碱50mg组（D组）、苦参碱100mg组（E组），使用博来霉素气管注射法复制肺纤维化大鼠模型，D、E组分别注入苦参碱50，100mg/kg，1次/d；C组注入醋酸泼尼松0.56mg/Kg，1次/d，分别于7d、14d、28d每组各随机处死大鼠8只，取肺组织HE及Masson染色；ELISA法检测8-异前列腺素浓度； western blot法检测肺组织gamma;-GCS蛋白质的表达。结果：①实验模型组有程度不等的肺泡炎及明显纤维化。各治疗组肺泡炎及肺纤维化程度减轻，与模型组相比差异显著，大剂量苦参碱组度减轻更显著（P＜0.05）。②实验模型组有程度不等的8-异前列腺素浓度升高，与模型组相比差异显著；大剂量苦参碱组升高幅度最低P＜0.05）。③实验模型组表现有程度不等的gamma;-GCS升高，与模型组相比差异显著（P＜0.05）。结论：1.苦参碱能抑制博来霉素诱导的大鼠肺纤维化；2.苦参碱可能是通过调节氧化/抗氧化平衡而发挥抗纤维化作用。 【关键词】肺纤维化；谷氨酰半胱氨酸合成酶；肺系数；苦参碱 【中图分类号】R256.1【文献标识码】B【文章编号】1007-8231（2011）12-2231-03 肺纤维化是许多肺间质疾病的共同结局，发病机制尚未完全明确，临床缺乏特异的治疗药物［1］，病情一般持续性进展，最终多死于呼吸衰竭 ［2］ 。 近年研究发现，氧化/抗氧化失衡可能在肺纤维化发病机制中发挥重要作用［3-6］。苦参碱具有抗纤维化作用，本实验使用苦参碱对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠进行干预，探讨其对肺纤维化的保护作用及其机制，为临床使用苦参碱治疗肺纤维化提供理论依据。 1材料和方法 1.1主要试剂醋酸泼尼松片（天津太平洋制药有限公司生产）；注射用盐酸博来霉素（日本化药株式会社生产）；注射用苦参碱（江苏正大天晴药业股份有限公司生产） 1.2实验动物 健康SD雄性大鼠120只（由南华大学动物室提供），10周龄左右，体重200plusmn;13 g，喂养于南华大学动物室。按随机数字表法随机分成5组：空白对照组（A组）、博来霉素组组（B组）、泼尼松组（C组）、苦参碱50mg组（D组）苦参碱100mg组（E组），每组各24只。按陈祥银等［7］报道的方法制备肺间质纤维化模型。A组气管内注入生理盐水200mu;l；B、C、D、E四组气管内分别注入200mu;l含100mu;gBLM-A5（5mg/kg）的无菌生理盐水。 1.3给药方法 造模后第1d起，空白对照组及博来霉素组经胃管注入生理盐水2ml，每天1次；泼尼松组经胃管注入醋酸泼尼松片0.56mg/kg体重，每天1次；苦参碱50mg组和苦参碱100mg组分别经胃管注入苦参碱50mg/kg体重、200mg/kg体重（溶于2ml生理盐水），每天1次。 1.4标本处理 分别于造模后第7d，14d，28d处理，每批每组随机抽取8只，取腹主动脉血后处死；分离肺脏，常规脱水、包埋、切片、脱蜡，行HE染色或Masson胶原染色后，脱水、封片、光学显微镜下观察并照相；余肺组织置经DEPC水预处理后高温消毒的EP管中，以液氮罐迅速转移至-80℃冰箱保持。 1.5结果获取 1.5.1肺系数的计算 计算方法为：肺系数=肺重（mg）/体重（g）。 1.5.2肺泡炎症、肺纤维化程度判断 右肺石蜡切片进行HE、Masson染色，在光学显微镜下观察肺组织病理学改变。参照Szapiel等［8］的方法用HE染色评定肺组织肺泡炎症程度( - ～ + + + )，Masson染色评定肺组织纤维化程度( - ～ +++ )。 1.5.3gamma;-GCS蛋白表达检测 右肺组织解冻后行免疫印迹（Western blot）检测。图像分析系统（上海Tanon Gis-2010）对扩增产物条带吸光度半定量，计算待测条带的吸光度times;面积与内参照beta;-actin的吸光度times;面积的比值。 1.5.4gamma;-GCSmRNA表达检测 右肺组织按说明书用TRIZOL试剂（上海生工）提取总RNA，使用逆转录试剂盒（MBI Fermentas公司