苦参碱类生物碱抗病毒活性实验研究进展.docVIP

精品论文 参考文献 苦参碱类生物碱抗病毒活性实验研究进展 农格 广西南宁市第六人民医院530003 关键词：苦参碱氧化苦参碱抗病毒 苦参碱类生物碱是以苦参碱为代表的化学结构相似的一类生物 碱。这一类生物碱还包括氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱、槐醇碱、槐 胺碱、氧化槐果碱、莱曼宁等，他们广泛存在于豆科植物苦参 ( S.flavescens Ait )，苦豆子(S. alopecuroides L)及广豆根(S. subprostrata Chun et T.Chen)中，是这几种常用中草药的主要有效成分【1】。由于 这几种中草药的主体成分相似，所以，他们在药效上也很接近，都具 有清热、燥湿、杀虫、利尿等功效，其作用广泛，效果明显【2】。 1 对 HepG 2.2.15 细胞株的抗病毒作用 HepG 2.2.15 细胞株[表达乙型肝炎病毒(HBV)的人肝细胞]为体外 抗HBV 药物的筛选细胞模型。该细胞株是1976 年Sells 等通过共转 染的方法将克隆的HBV DNA及??G418 抗体质粒导入人肝癌细胞株 HepG2 之中建立成功的。这种细胞株导入了HBV DNA可表达全部病 毒标志，能长期稳定地向培养上清液中分泌HBsAg(乙肝表面抗原)、 HBeAg(乙肝e 抗原)和完整的Dane 颗粒(乙型肝炎病毒大球形颗粒)， 并能产生大量的病毒复制中间体。同时转染细胞具有新霉毒抗性的选 择表性遗传性，能使其宿主在含有新霉毒的类似物G-418 的选择培 养基中得以生长，而转染不成功的细胞由于不具备新霉毒抗性的筛选 标志而被淘汰。该细胞株的建立为研究乙肝病毒的结构和功能、基因 表达和调控以及体外抗HBV 药物的初筛提供了有效的模型，HepG 2.2.15 细胞株已经成为国内外通用的细胞模型，广泛用于体外抗HBV 药物的筛选。HBsAg 和HBeAg 是HepG 2.2.15 细胞分泌到培养上清液 中的可溶性蛋白质，能够间接地反映病毒复制状况。观察HepG 2.2.15 细胞分泌HBV 抗原的变化，可以判断药物的疗效。但是应用HepG 2.2.15 细胞模型研究抗HBV药物也有局限性，虽然它再现了HBV在 肝细胞的复制和表达，但脱离了机体免疫系统对HBV 产生影响的环 境。有些HBV药直接抑制HBV病毒，另一些则是通过增强免疫系统 调节而间接对HBV产生抑制及清除作用，后者不能通过HepG 2.2.15 细胞为模型作为临床研究的实验依据。应用HepG2.2.15 细胞模型进 行的药理学实验只能反映药物对HepG.2.2.15细胞HBV标志物的抑制 作用，但不能揭示药物通过对机体免疫功能的影响而发挥间接的抗 HBV 作用，无法反映由于药物治疗所激活的效应因子如细胞毒T 淋 巴细胞、HBV特异性抗体的作用【3】。 董培智【4】等采用含有HBV 基因组的HepG2.2.15 细胞模型观 察了苦参碱的体外抗HBV 作用。方法：4x104 个/mL 细胞接种于24 孔板，37℃5% CO2培养24 h 收取上清液后，更换培养基并加人不同 浓度的苦参碱。每3d 收取上清，换原浓度药液继续培养，共9 天。 用酶联免疫法测定上清中HBsAg和HBeAg,酚氯仿抽提被裂解细胞中 的HBV DNA，用荧光定量PCR法测定细胞内及细胞外HBV DNA的 拷贝数。结果：0.025 ndash; 0.5 mg/ml 的苦参碱给药9d，对HepG2.2.15 细胞分泌HBsAg 的半数抑制浓度(IC50)为0.14 mg/ml，选择指数(SI) 为5.66；对HBeAg 的IC50 和SI 分别为0.29 mg/ml 和2.69；对细胞内 HBV DNA的IC50和SI分别为0.109 mg/ml和7.0；对细胞外HBV DNA 的IC50 和SI 则分别为0.120mg/ml 和6.39。结果表明，苦参碱对 HepG2.2.15 细胞中人乙型肝炎病毒的复制有不同程度的抑制作用，结 果还提示，苦参碱对于细胞外HBV DNA的抑制作用在9 天最强。 李常青【5】等采用同样的体外细胞模型评价了苦参碱脂质体的 体外抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。实验比较了苦参碱脂质体及非脂质 体对2.2.15 细胞分泌HBsAg、HBeAg 的影响及药物的细胞毒性，结果 表明，苦参碱脂质体、苦参碱作用于2.2.15 细胞lld 后，对细胞的半 数毒性浓度(TC50)分别为7.29mg/ml和1.33mg/ml，对HBsAg 和HBeAg 抑制的半数有效浓度(IC50) 分别为0.078 mg/ml,3.35mg/ml, lt; 0.078mg/ml