分子肿瘤概论上传.ppt

二.肿瘤学研究中常用的分子生物学基本技术及其应用 (一)基因扩增的检测 1.过量的蛋白表达 ---免疫组化（荧光）定位 ---ELISA和Western blot 定量 2.基因拷贝数的增加、转录产物mRNA的增加 ---- 核酸分子生物学方法进行检测 常用方法 (1)核酸分子杂交（nucleic acid molecular hybridisation）技术 最常用的基本技术 1.原位杂交 （ISH） 2.荧光原位杂交 （FISH）， 3.双色（多色）银染原位杂交（DSISH） 3.Southern blot (DNA 杂交) 4.Northern blot (RNA 杂交) （2）聚合酶链反应（polymerase chain reaction , PCR）技术 又称体外基因扩增 扩增产物的检测 凝胶电泳分析 琼脂糖凝胶电泳 (最常用) 聚丙烯酰胺凝胶电泳 定量PCR Real-time PCR 原位PCR RT-PCR 3.基因芯片技术 (二)基因突变的检测方法 1.聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single strand conformation polymorphism analysis of polymerase chain reaction products , PCR-SSCP） 基本方法 * * 分子肿瘤概论 一、肿瘤浸润、转移的分子机制 肿瘤浸润、转移的步骤 1.肿瘤细胞增殖 2.肿瘤血管生成(tumor angiogenesis) 3.肿瘤细胞分离脱落 4.肿瘤细胞迁移(migration) 5.与细胞外基质黏附,降解细胞外基质 6.瘤细胞以主动方式入循环管道并形成栓子 7.在特定器官的毛细血管滞留并黏着，再次穿过血管壁并定居、增殖 （一）肿瘤细胞增殖和扩展 浸润转移的前提和基础 （二）肿瘤血管生成(tumor angiogenesis) 肿瘤浸润转移的必要条件 （三）肿瘤细胞分离脱落，与细胞外基质黏附 1.瘤细胞表面负电荷增加 2．瘤细胞黏附力的改变 1）瘤细胞自身结构异常 2）瘤细胞同质黏附力下降 3）瘤细胞异质黏附力增加 指肿瘤细胞与其它不同细胞及间质的黏附力 黏附因子介导 通过配-受体之间的识别和结合实现 3．肿瘤黏附因子(adhesion molecules) ① 钙黏蛋白(cadherin) 又称为钙连接素，钙黏素。 依赖细胞外钙 介导钙离子依赖性细胞与细胞（同源细胞）的黏附 作用 a.介导细胞与细胞外基质的黏附 b.参与不同细胞之间的黏附连接 C.扮演细胞信号传递的角色 ③ 免疫球蛋白超基因家族(immunoglobulin superfamily) 主要参与细胞与细胞间的连接 ICAM-1 （细胞间黏附分子-1） VCAM-1 （血管黏附因子） NCAM （神经细胞黏附因子） 其它 包括CEA 、DCC ④选择素(selectin) 内源性植物凝血素（凝集素） 作用 介导内皮细胞、血小板与瘤细胞黏附 选择素家族包括： P-selectin E-selectin L-selectin ⑤ CD44 及其它 CD 44(透明质酸受体) 路易斯寡糖（SLEX，,s-LewisX ） 血管内皮细胞 E-选择素的配体 跨膜超级家族基因蛋白（TM4ST） 六种成分：CD9、CD37、CD53、CD63、CD81、CD82 调节整合素的黏附功能 （四）瘤细胞的迁移(migration)及化学趋向性 1．瘤细胞的运动 黏附；肌动蛋白、微管、中间丝 2．瘤细胞运动的调节 据其作用，大致可分为两大类： 既影响运动又影响生长的因子： （1） AMF (自分泌运动因子) （2） MSF（迁移刺激因子） （3） HGF/SF（肝细胞生长因子/分散因子) HGF 和AMF是近期发现的最强大的动力因子 3．瘤细胞的化学趋向性 21KD 的蛋白质 骨吸收因子 （五）细胞外基质的降解 1．肿瘤细胞产生的蛋白水解酶 （1）丝氨酸蛋白酶类及其抑制因子 ①纤溶酶 (纤维蛋白溶解酶) 纤溶酶原 ② 尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plas