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苦丁茶中熊果酸的提取工艺 （金华职业技术学院生物制药技术专业 俞俊豪） 摘 要:在苦丁茶中提取熊果酸的过程中,采用实验分析研究了乙醇浓度、液固比、提取时间、提取次数等与熊果酸提取率的关系。根据实验的分析结果表明:对于熊果酸的提取率,乙醇浓度与其关系最大,提取时间和固液比的影响次之;最佳回流提取工艺条件为:以90%乙醇水溶液为提取液,液固比为12：1,回流提取3次,每次提取3h 时,熊果酸的提取率可达到1.769%。 关键词:苦丁茶；熊果酸；提取 引言 苦丁茶是冬青科冬青属植物,有散风热、清头目、除烦渴、降压和降脂等作用的功能。 在我国至少有两千多年的产饮历史[1],其历史悠久且被广泛使用在我国南部及西南部的民间。现代药理研究结果表明,苦丁茶中的熊果酸既能降血脂,也能降肝脂,是具有开发潜力的降脂护肝药物[2-5]。熊果酸广泛存在于苦丁茶、批把叶、山楂叶、车前草、夏枯草等天然植物中。其中苦丁茶中熊果酸的含量较高,每100g苦丁茶含熊果酸达1g。但目前对苦丁茶的研究集中在确定其化学成分和药理作用两方面,对苦丁茶中熊果酸的提取与分离纯化缺乏系统的研究。为此,苦丁茶中熊果酸的提取工艺为广大研究人员研究的重心。 1 实验药品及仪器 药品:苦丁茶,在50 ℃ 时干燥,然后粉碎备用；乙醇、甲醇等,为分析纯；熊果酸标准样品,纯度为90%；蒸馏水，醋酸等。 仪器:电热恒温水浴锅；电子天平；BT8100 高效液相色谱仪；BT8200紫外可见检测；植物粉碎机 2 实验方法和分析 2.1乙醇浓度对熊果酸提取的影响试验 称取5.0g 苦丁茶粗粉,分别加入浓度为60%,70%,80%,90%,95%的乙醇水溶液40 mL,在85℃水浴中回流提取3次,每次提取3h。3次提取液,测定并计算各条件下的提取率。 2.2 固液比对熊果酸提取的影响试验 在85℃时,将5.00g苦丁茶粗粉分别用 25,30,35,40,50 和60 mL,浓度为95% 的乙醇溶液回流提取3次,每次2h。合并3次提取液,测定并计算各条件下的提取率。 2.3提取时间对熊果酸的影响试验 在85 ℃时,对5.00g 苦丁茶粗粉按12∶1 的液固比加入60 mL浓度为95%的乙醇回流提取,提取3次,每次分别提取1.0,1.5,2.0,2.5 和3.0 h ,合并3次提取液。测定并计算不同提取时间的提取率。 2.4回流提取次数对熊果酸的影响试验 在85 ℃时,将5.00 g 苦丁茶粗粉加入40 mL体积分数为95% 的乙醇进行回流提取,分别提取1,2,3 和4 次,每次回流提取3 h 。合并提取液,测定并计算不同提取次数的提取率。 2.5色谱条件 固定相为色谱柱(直径为10μm ,填料尺寸(高×直径)为250 mm×4.6 mm)；流动相为甲醇、水和醋酸(体积比为90∶10∶0 .02)，流速为0.5ml/min；检测波长为220nm；灵敏度为0.16。 2.6线性关系的确定 准确称取熊果酸标样,用甲醇溶解后配制成质量浓度为0.8040g / L 的熊果酸标准溶液,作为测定样品的标准溶液。 分别移取0.8040 g / L 的熊果酸标准溶液0,2.0,4.0,6.0,8.0 和10.0 mL,用甲醇定容至10mL,配制成标准系列。在色谱条件下,吸取上述溶液,分别进样6μL ,对每种浓度重复测定6次,得到如下回归方程:A=524170c-902.5,R=0.9998。 其中:c为熊果酸标准溶液的浓度；A为峰面积。当果酸标准液的浓度为0.1608～0.8040 g/L 时,A与c线性关系。 2.7样品的测定 样品与标准曲线在相同的色谱条件下测定,根据回归方程得到样品中熊果酸的含量。 2.8回流提取温度的确定 当水浴温度为85℃时,提取液在微沸状态下进行回流,因此在单因素实验中选择水浴温度为85℃。 3 结果与讨论 3.1 各个对熊果酸提取率的单因素实验 3.1.1 乙醇浓度对熊果酸提取率的影响 实验结果如图1所示。从图1可以看出:熊果酸的提取率随乙醇浓度的增大而提高。熊果酸为弱极性分子,溶于乙醇,不溶于水[7],提取溶液中乙醇含量越高,溶剂极性越弱。根据相似相溶原理,熊果酸的溶解度随提取液中乙醇含量的升高而增大。在工业生产中乙醇浓度受到限制,可采用90%～95%的工业乙醇作提取液提取苦丁茶中的熊果酸。 图1乙醇浓度φ对熊果酸提取率η的影响 3.1.2液固比对熊果酸提取率的选择 实验结果如图2所示。图2可知,当液固比为5时,提取率为0.54%；液固比为7时,提取率为1.16%；当液固比达到12时,提取率为1.22%。结果表明:熊果酸在95%乙醇中溶解有限,熊果酸的提取率在液固比达到7后变化较小。因此,选择液固比为7。 图2液固比对熊果酸浸出率η的选择 3.1.3提取时间与熊果酸提取率的关系