血清HBV-DNA定量与HBV血清标志物的相关性研究.docVIP

精品论文 参考文献 血清HBV-DNA定量与HBV血清标志物的相关性研究 黄锦莲 （福建省沙县医院 365500） 【摘要】目的 探讨HBV血清标志物ELISA法与乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）荧光定量检测的关系。方法　采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA含量，同时用ELISA法检测HBV血清标志物。结果　HBsAg HBeAg HBcAb阳性组患者血清中HBV-DNA阳性率要明显高于HBsAg HBeAb HBcAb阳性组患者，HBeAg与HBV-DNA拷贝数有显著性差异（Plt;0.05）。结论　血清中HBV-DNA含量与乙肝免疫标志物之间存在密切的关系，在各种HBV模式中，以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高。ELISA法不能直接反应乙肝患者血清中的病毒含量，PCR检测可以体现病毒的复制情况，对乙肝的早期诊断、制定治疗方案、尤其是对抗病毒治疗的疗效观察有重要的治疗意义。 【关键词】HBV 聚合酶链反应 HBV-DNA 血清标志物 【中图分类号】R446.11【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）35-0163-01 乙型肝炎病毒的感染可引起一系列疾病的发生，是世界上最常见的传染病之一，可从无症状的病毒携带者或隐形感染者到急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌。在我国60%的人受过HBV感染，在现患慢性肝炎患者中约80%以上为慢性乙型肝炎患者，而受HBV慢性感染的人群患原发性肝癌的危险性相对增高。所以，加强对HBV的防治显得十分重要。 当前，临床上HBV感染的诊断主要来源于HBV血清免疫标志物ELISA法与HBV-DNA荧光定量检测。HBV血清免疫标志物（HBVM）反映的是机体对HBV的免疫反应强度，HBV-DNA是血清中HBV存在与复制的直接标志。本文通过对306例乙型肝炎患者HBV血清免疫标志物表达情况以及HBV-DNA含量来研究机体针对HBV的免疫反应强度、HBV复制程度之间的关系，帮助临床医生更准确诊断HBV的感染，对判断患者的病情、预后及抗病毒治疗有重要的指导作用。 1 材料与方法 1.1 检测对象 306例乙型肝炎患者为我院的住院及门诊病人。年龄8岁～75岁，平均44.5岁，其中男性210例，女性96例。 1.2 方法 1.2.1 HBV-DNA荧光定量PCR检测 采用厦门安普利公司Amplly 2400型扩增仪进行PCR扩增。PCR诊断试剂盒购自厦门安普利HBV-DNA原装配套试剂。（1）HBV-DNA模板提取：取血清样本50ul，加入裂解液100ul，裂解液使用前应振摇混悬，然后分别加入待测标本或标准品50ul，混悬，室温静置10min；10000g离心25s，去上清；加入150ul洗涤液，混悬，10000g离心25s，去上清；加入150ul重复洗涤液，混悬，10000g离心25s，去上清备用。（2）加样：步骤（1）制备的沉淀分别用反应缓冲液30ul混悬，取25ul加入反应管中，混匀，稍微离心，置入荧光PCR扩增仪内。（3）上机检测：38℃5min，95℃10min；进入以下循环：95℃15s，58℃50s（30s后读荧光），40循环。以每毫升DNA拷贝数表示HBV-DNA含量。 1.2.2 血清标志物侧定 采用ELISA方法检测HBV标志物。ELISA试剂盒购自厦门英科新创有限公司，操作按说明书。 2 结果 306例血清标本根据HBVM的模式情况及HBV-DNA检出的结果不同，进行分组，其结果见表1。 表1 HBV-DNA定量结果与ELISA法检测结果的比较 HBVM类型 例数 HBV-DNA阳性数 HBV-DNA阳性率(%) 1、HBsAg HBeAg HBcAb阳性组 101 96 95.1 2、HBsAg HBeAb HBcAb阳性组 123 67 54.5 3、HBsAg HBcAb阳性组 79 46 58.2 4、HBcAb阳性组 3 0 3 讨论 本文对306例乙型肝炎患者进行血清免疫标志物和HBV-DNA荧光定量PCR检测，结果发现HBV血清标志物阳性不同的模式中存在不同的病毒复制，HBsAg HBeAg HBcAb阳性组HBV-DNA荧光定量PCR检出率95.1%，其HBV-DNA拷贝数显著高于其他组（Plt;0.05），说明这种乙肝病毒血清标志物模式阳性者具有很强的传染性，HBV