血清线粒体DNA在急性阑尾炎诊断中的应用.docVIP

精品论文 参考文献 血清线粒体DNA在急性阑尾炎诊断中的应用 代斌 李强 唐一丁 　　（成都市龙泉驿区第一人民医院普外二科 四川 成都 610100） 　　【摘要】 目的：评估血清线粒体DNA（mtDNA）在急性阑尾炎（AA）诊断中的价值。方法：纳入拟诊AA患者164例及健康对照38例，采集外周静脉血，检测白细胞计数（WBC）和C反应蛋白数值（CRP）、血清mtDNA水平。比较确诊AA患者与健康对照及非AA患者上述指标差异，并通过受试者工作曲线（ROC曲线）分析上述各指标诊断AA的效能。结果：AA患者上述指标显著高于健康人和非AA患者（Plt;0.05）。ROC曲线分析显示，WBC、CRP和mtDNA的曲线下面积分别为0.776、0.884和0.943。mtDNA诊断AA的灵敏度为0.911，特异度为0.926。结论：mtDNA可能参与AA的发生发展过程，诊断效力高于WBC和CRP，可作为诊断AA的辅助指标，未来可能在临床推广。 　　【关键词】 急性阑尾炎；线粒体DNA；ROC曲线；诊断 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）19-0147-03 　　急性阑尾炎（acute appendicitis，AA）是普通外科常见急腹症之一，各个年龄段均易感，总体患病率约7%[1]。急性阑尾炎的诊断主要依赖于症状体征和常规临床检查手段，如白细胞计数（WBC）、C反应蛋白和影像学检查（彩超、CT等）[1]。虽然临床有诸多手段可以诊断急性阑尾炎，但上述诊断方法仍不能达到完全准确诊断AA的效果。据文献报道，阑尾切除术中的无炎症阑尾比例高达5～40%；而漏诊AA导致手术时机推延可引起5～30%阑尾穿孔。所以，迫切需要一种新的方法来辅助诊断AA。线粒体DNA（mitochondrial DNA, mtDNA）是一种新发现的内源性致炎因子，其释放入血可引起典型的全身炎症也反应；同时，mtDNA也可以作为有效的指标辅助诊断炎症相关性疾病[2]。本研究拟对拟诊AA患者进行血清mtDNA及常规WBC和血清CRP检测，以评估血清mtDNA在AA诊断中的价值。 　　1.资料及方法 　　1.1 临床资料 　　本研究纳入2013年9月～2015年9月拟诊为AA的入院患者164例，其中男性87例，女性77例；年龄12～70（42.4plusmn;30.8）岁。拟诊AA的患者均接受阑尾切除术。根据术中病理结果分组，分别分为B组（非阑尾炎组42例），包括急性右侧附件炎21例，右侧卵巢黄体破裂出血11例，右侧输尿管结石8例，麦克尔憩室2例；C组（急性单纯性阑尾炎69例）；D组（急性化脓性阑尾炎53例）。同时纳入同期体检的健康人38例（A组），男20例，女18例，年龄13～68（39.7plusmn;28.9）岁，健康人均排除肝胆、血液系统及免疫系统疾病。 　　1.2 观察指标及方法 　　A组健康人于清晨空腹采集外周静脉血；B、C和D组患者与入院当时采集外周静脉血，即时送我院检验科行血常规检测得到WBC数值和检测CRP；同时将采集的血液标本通过1000g/min离心后取上清，即得到血清，-80℃保存，一月内通过实时荧光PCR检测mtDNA水平。 　　mtDNA检测方法[3]：血清中mtDNA浓度测定使用基于SYBR-Green染色的荧光定量PCR技术分析。人类mtDNA（human NADH dehydrogenase 1 gene）引物上游为：CGAGCAGTAGCCCAAACAAT；下游为：TGTGATAAGGGTGGAGAGGTT。荧光定量PCR检测mtDNA浓度步骤为：初始阶段2分钟，50℃；第一步变性温度为95℃，3分钟；紧接着是95℃10秒钟、55℃15秒钟和72℃ 10秒钟的循环，共39个循环。 　　标准曲线为携带有人类mtDNA的质粒（SC101172，ORIGENE，USA）十倍梯度稀释获得。mtDNA浓度使用标准的转换系统转换成拷贝数（/gsc/cndna.html）。 　　血清mtDNA浓度的计算公式为：c= Qtimes;VDNA/VPCR times;1/VEXT 　　其中c代表血清中mtDNA的浓度；Q代表荧光定量PCR检测的样本中mtDNA的拷贝数；VDNA代表每个血清样本中提取DNA的总体积，本实验中为200mu;l；VPCR代表荧光定量PCR时加入DNA的体积，本实验中为1mu;l；VEXT代表提取DNA时使用的血清的量，本实验中为50mu;l。 　　1.3 统计分析 　　所有计量资料数据均以均数plusmn;标准差(Meanplusmn;SD)表示，各组数据比较前行方差齐性检验，如方差齐则进一步行